2017 Fiscal Year Research-status Report
エピゲノム修飾因子の機能解析による小児固形腫瘍の発症機構解明
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16K08745
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
大喜多 肇 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 准教授 (50317260)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
清河 信敬 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 小児血液・腫瘍研究部, 部長 (60195401)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 腎腫瘍 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
腎明細胞肉腫は小児腎腫瘍としては腎芽腫に次ぐ頻度で、BCL6 corepressor(BCOR)のC末端の約100塩基の重複（BCOR遺伝子内重複）を共通の遺伝子異常として有する。同様の遺伝子変異は小児の未分化肉腫や脳腫瘍の一部、子宮内膜間質肉腫の一部でも報告されている。BCORはBCL6 corepressorとして単離された転写抑制因子であるが、異性型PRC1（BCOR複合体）の要素として機能することも示されている。本変異は、BCOR複合体形成に必要な機能ドメインを含む領域に存在することから、腫瘍発生のドライバーと想定されている。一方、近年、ユーイング肉腫に類似した小円形細胞肉腫の多くに、BCORとCCNB3の融合遺伝子が存在することが報告されている。本研究では、これらのBCOR変異・融合遺伝子による腫瘍発生機構解明を目的としている。NIH3T3細胞に、野生型BCOR、BCOR遺伝子内重複、BCOR変異、BCOR-CCNB3を遺伝子導入し、形質転換能をColony formation assayにて解析したが、いずれの遺伝子においてもcolony formationの明らかな促進はみられなかった。そこでA673(Ewing肉腫細胞)に野生型BCOR、BCOR遺伝子内重複、BCOR変異、BCOR-CCNB3を遺伝子導入し、腎明細胞肉腫に特徴的に高発現な遺伝子の発現解析をrealtime PCR法にて解析したが、有意な遺伝子発現変化は認められなかった。腎明細胞肉腫では、野生型のBCORが発現せず遺伝子内重複のみを発現することから、293細胞にBCOR遺伝子内重複を導入した安定細胞株を樹立、内在性のBCORをノックダウンし、遺伝子発現を検討している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
HEK293細胞、NIH3T3細胞、A673細胞において、mock、野生型BCOR、BCOR遺伝子内重複、BCOR変異、BCOR-CCNB3を遺伝子導入し、腎明細胞肉腫で特徴的な遺伝子群の発現解析を行ったところ、代表的な遺伝子群には有意な変化は同定できなかった。BCOR変異による効果は、野生型BCORの発現や、BCORと関連する分子の発現との関係が重要とも考えられ、当初予定していた解析を延期し、当初予定していた細胞種と異なる細胞も用いて検討しており、研究の進行がやや遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
BCOR遺伝子内重複変異、BCOR-CCNB3による腫瘍形成は、細胞環境に依存する、また、内在性の野生型BCOR発現の影響を受ける可能性があるため、関連分子の発現状況なども勘案しつつ細胞種の選定を進めるとともに、内在性のBCORの除去も含めて検討し、細胞実験系の解析を進める。その上で、遺伝子発現解析、エピジェネティクス解析、形質変化の解析を進める。
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| Causes of Carryover |
本年度に予定していたエピジェネティクス解析に実施していない部分があるため、次年度に使用する。次年度は、本年度予定していたエピジェネティクス解析に使用するとともに次年度予定の解析にも使用する。
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