2018 Fiscal Year Annual Research Report
Development of a new detection method in antithrombin resistance to avoid the effect of antithrombotic drug treatment
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16K08967
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
高木 明 名古屋大学, 医学系研究科(保健), 客員研究者 (30135371)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小嶋 哲人 名古屋大学, 医学系研究科(保健), 教授 (40161913)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 凝固第X因子 / アンチトロンビン / 抗血栓薬 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ヒト凝固第X因子（野性型）の全長cDNA およびヒトFurin の全長cDNA をヒト肝臓由来cDNA ライブラリーよりPCR クローニングした。野生型凝固第X因子cDNAにアンチトロンビンとの親和性に重要と思われる部位(p.372Arg)に変異を導入し変異型cDNA をクローニングした。野生型および変異型凝固第X因子発現ベクターを作成した。Furin発現ベクターを構築し、凝固第X因子・Furin共安定発現細胞株の樹立を目指した。安定細胞発現細胞株作成に使用する細胞株を従来使用してきたHEK293に加えて、より発現量が多くなることを期待してHEK293T細胞も使用した。細胞株共発現のため細胞株選択に使用する抗生剤を２種類組み合わせて、より生理的なFurinによる水解を受けた２本鎖のリコンビナント凝固第X因子発現系を構築した。
生理的凝固第X因子アクチベータ（活性型第VII因子・組織因子・カルシウムイオン）を用いた凝固第X因子活性化法を検討した。変異凝固第X因子の性状、検出測定法を検討・設定し、アンチトロンビン抵抗性凝固第Xa 因子を検出する測定系を設定した。第Xa因子特異的発色性合成基質に従来品(S-2222)に比して高感度の基質(S-2765)が入手可能と2種類の発色性合成基質を使用した。アンチトロンビン抵抗性凝固第Xa因子検出検査法においても各種抗血栓薬（未分画ヘパリン、低分子量ヘパリン、フォンダパリヌクス、エドキサバン、リバーロキサバン、アピキサバン）の影響およびその回避法を検討した。
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