Effective technique establishment to distinguish polymorphisms or mutations for variants in an unifactorial diseases.

2018 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16K08978
• Research Institution: Nihon University
• Principal Investigator: 中山 智祥 日本大学, 医学部, 教授 (00339334)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 羽田 明 千葉大学, 大学院医学研究院, 教授 (00244541)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 単一遺伝子疾患 / 多型 / 変異 / バリアント / ハプロタイプ

Outline of Annual Research Achievements

常染色体優性遺伝病である多発性内分泌腫瘍症（multiple endocrine neoplasia: MEN）1型および2型、常染色体劣性遺伝病であるGitelman症候群、網膜色素線条症の患者さんからのDNAサンプルの収集を継続していき、血漿を－70から－80℃のディープフリーザーに凍結保存するとともに随時核酸抽出を進めた。同検体のバフィーコートの白血球からフェノール・クロロホルム法にてゲノムDNAを抽出した。一部のDNAは濃度調整し、今後の解析にすぐに使用可能な状態にした。各検体からの回収量は充分にあり、また分光光度計を用いた吸光度測定においてDNA純度は良好であった。遺伝学的検査の前後では施設内のクライエントについては研究申請者自ら遺伝カウンセリングを実施し、クライエントのご理解を深めるよう努める。DNA濃度を測定し、解析に使用できるように一定濃度に調整した。
次世代シークエンサーによるターゲットリシークエンシングあるいはエクソーム解析、キャピラリーシークエンサーによるサンガー法によるダイレクトシークエンシングなどでの塩基配列決定、TaqMan(R) PCR法など遺伝型を確認し、対象者において一つの遺伝子全長の塩基配列決定を進めた。新たにハプロタイプを用いた関連解析を実施できる最新のソフトウェアを準備でき、より細かな解析ができるように備えることができた。研究分担者間の連携については、随時研究進捗状況についてお互いに報告し合い、研究をより円滑に進められるように努めることができた。平成30年度をもって研究計画の最終年度となった。今後得られたデータを基にバリアントが多型か変異かを区別できるような効率的手法が確立できるような成果がまとまるように努める。