加齢，メタボリック症候群及び発癌におけるmiR-301aの機能解析

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K09242
• Research Institution: Kagawa University
• Principal Investigator: 藤田 浩二 香川大学, 医学部附属病院, 病院助教 (50749421)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 正木 勉 香川大学, 医学部, 教授 (30335848) ; 森下 朝洋 香川大学, 医学部附属病院, その他 (60423430)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: miRNA / トランスジェニックマウス / 加齢 / 癌 / メタボリック症候群

Outline of Annual Research Achievements

本研究はmiR-301aの機能解析を目的として，1) miR-301aの前駆体の遺伝子組み換えマウスを作出すること，2) 作出されたマウスの表現型解析，3) 作出されたマウスを用いた幾つかの追加実験を課題としている．当初はmiR-301a前駆体のノックアウトマウスを作出し，その後の研究に供する計画であった．しかし，遺伝子組み換えマウスの国際プロジェクト(the Keck miRNA nockout Project)において，過去にmiR-301aの作出に失敗したことが報告されていた．そのため，作出のより容易なトランスジェニックマウスに方針を変更した．miR-301aのトランスジェニックマウスの作出をユニーテック株式会社に委託し，2018年1月に当該マウスが納品された．初代トランスジェニックマウス(F0)から数えて三代目(F2)の雄マウスを当科にて野生型雌マウスと交配させ，産仔29匹のうち8匹の組み換え遺伝子陽性マウスを得た．miR-301a前駆体のトランスジェニックマウスの作出例については，当科で文献を調べた限りではまだ報告されていない．本年度の成果は，基礎研究におけるマウス資源に寄与するものである．また，in vivoでmiR-301aの機能を解析する際の有用な研究材料となる．なお，the Keck miRNA nockout Projectの最新の報告によれば，海外の研究者がmiR-301aのノックアウトマウスの作出に成功したとのことである．本研究において，ノックアウトマウス作出の方針をトランスジェニックマウス作出の方針に改めた結果，ノックアウトマウスの重複を避けることができた．

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

遺伝子組み換えマウスは作出に失敗することも少なからずあるが，本研究においては，miR-301aの前駆体のトランスジェニックマウスの作出に成功し，かつ野生型マウスとの交配・継代も順調である．

Strategy for Future Research Activity

今後は，組み換え遺伝子陽性マウスと同腹の陰性マウスを8週齢で犠死させ，各臓器におけるmiR-301a及びその前駆体の発現を定量し，比較する．

Causes of Carryover

次年度使用額が発生した原因は，遺伝子組み換えマウスの種類をノックアウトからトランスジェニックに変更した結果，マウスの作出費用が軽減されたことによる．次年度使用額の使途については，作出されたマウスの表現型解析が必要であるが，解析結果に客観性を持たせるため，外部の機関に有料で表現型解析を委託することを検討している．