2016 Fiscal Year Research-status Report
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16K09302
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
荒木 昭博 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 准教授 (80361690)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
土屋 輝一郎 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 准教授 (40376786)
渡辺 守 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 教授 (10175127)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | HD6 / 抗菌物質 / 粘膜バリア能 / 炎症性腸疾患 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
小腸内視鏡の登場と共に申請者らが一貫して「ヒト」小腸構造の制御機構の解明に努めてきた。健常人の基本データを構築することで、クローン病における炎症に影響しない発現差異を世界で初めて示しており、その一つとして抗菌物質HD6に着目した。クローン病では小腸全域にわたりHD6発現細胞が減少していることを発見し、HD6の減少が粘膜防御能に深刻な影響を与えることが示唆された。そこで、申請者らが独自に開発したヒト小腸上皮初代培養の技術とHD6プロモーター解析結果を融合させ、HD6発現を可視化することにより発現動態を詳細に解析することを可能とし、低分子化合物を用いてHD6発現誘導機構を明らかとすることで、クローン病の新しい治療としてHD6ナノネット形成を主眼とした粘膜防御増強治療の開発を目的とする。
今年度は小腸内視鏡検体を用いて、HD6の発現細胞がクローン病空腸において有意に低下していることを発見した。その一方でHD5の発現細胞に有意な差を認めなかったことから、HD6の発現制御に注目し、HD6のプロモーター解析を行った。その結果、HD5とは異なり、β-cateninのみならずAtoh1によりHD6転写活性が誘導され、さらにAtoh1の転写活性部位を同定し直接Atoh1がHD6プロモーターに結合することを証明した。HD5は抗菌活性を有しており、粘膜バリア機能に関わることから、これまで詳細な発現機構解析が報告されてきた。その一方で、HD6は抗菌活性を持たないと多数報告されたことから粘膜バリア能への寄与は低いと考えられ、また、HD5のプロモーター配列と高い相同性からHD5と同様の発現制御であると予想されたことから、詳細なHD6の発現制御解析はほとんど行われていない。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
内視鏡生検検体を用いてクローン病におけるHD6発現低下を明らかとし、HD6発現低下の分子メカニズムを同定しており、その成果を論文にて報告している。以上より、当初の予定通り概ね順調に遂行できている。
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| Strategy for Future Research Activity |
ヒト小腸オルガノイドは樹立済みであり、オルガノイドにおけるHD6発現及び、発現機構の解析を進める予定である。また、HD6の転写活性を可視化することで、HD6産生能を評価できるシステムを構築する。HD6プロモーター部位の下流にGFPを結合し、活性に応じて蛍光強度が増強するプラスミドを構築する。
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| Causes of Carryover |
内視鏡生検検体を主に解析を行ったため、見込みよりも安価となったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
ヒト小腸オルガノイドの樹立及び継代培養を行っており、その培養維持に必要な試薬として使用予定である。
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[Journal Article] PGE2 is a direct and robust mediator of anion/fluid secretion by human intestinal epithelial cells.2016
Author(s)
Satoru Fujii, Kohei Suzuki, Ami Kawamoto, Fumiaki Ishibashi, Toru Nakata, Tatsuro Murano, Go Ito, Hiromichi Shimizu, Tomohiro Mizutani, Shigeru Oshima, Kiichiro Tsuchiya, Tetsuya Nakamura, Akihiro Araki, Kazuo Ohtsuka, Ryuichi Okamoto, Mamoru Watanabe.
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Journal Title
Sci Rep.
Volume: 6
Pages: 36795
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Reduced Human ホア-defensin 6 in Noninflamed Jejunal Tissue of Patients with Crohn's Disease.2016
Author(s)
Hayashi R, Tsuchiya K, Fukushima K, Horita N, Hibiya S, Kitagaki K, Negi M, Itoh E, Akashi T, Eishi Y, Okada E, Araki A, Ohtsuka K, Fukuda S, Ohno H, Okamoto R, Nakamura T, Tanaka S, Chayama K, Watanabe M.
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Journal Title
Inflamm Bowel Dis.
Volume: 22
Pages: 1119-1128
DOI
Peer Reviewed
