2016 Fiscal Year Research-status Report
HBV転写制御領域を標的とする抗HBV薬開発の為の海洋生物由来シード化合物の探索
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16K09348
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| Research Institution | University of Yamanashi |
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Principal Investigator |
山下 篤哉 山梨大学, 総合研究部, 助教 (00334871)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | HBV / 転写制御 / 阻害化合物 / 海洋生物 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
研究代表者らは、HBVエンハンサーI阻害化合物の探索に必要なHBVエンハンサーIレポーター細胞を樹立するため、まず、HBVエンハンサーI レポータープラスミドの構築を行った。構築した幾つかのプラスミドについて、それぞれのエンハンサー活性を確認したところ、プラスミドpGL4.18 HBV EnhI X-Proが最も高い活性値を示した。そこで、このプラスミドをHuh7細胞に導入し、HBVエンハンサーIレポーター細胞の樹立を試みた。プラスミドpGL4.18 HBV EnhI X-ProをHuh7細胞に導入し、G418によってプラスミド導入細胞を選択した。G418耐性細胞の中で最もエンハンサー活性の高い細胞を Huh7GL4.18 EnhIX-Pro AeUS細胞とし、以後、この細胞をHBVエンハンサーI阻害化合物の探索に用いた。次に、樹立したHuh7GL4.18 EnhIX-Pro AeUS細胞を用いて、エンハンサー活性を抑制する化合物の探索を試みた。化合物探索のスクリーニングソースについては、沖縄近海に生息する海洋生物の抽出物および精製化合物を用いた。沖縄近海に生息する海洋生物の抽出物100種類についてスクリーニングを行った結果、１つの海洋生物抽出物にエンハンサーIを抑制する活性があることを見出した。また、この海洋生物抽出物はHBVエンハンサーIのみならず、HBVコアプロモーターの活性も抑制した。現在、ヒットした海洋抽出物よりHBVエンハンサーI活性を抑制する化合物の分離・同定を行っている。更に、20種類の海洋生物由来の精製化合物についても検討を行ったが、HBVエンハンサーＩ活性を抑制するものはなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
HBVエンハンサーI レポーター細胞を樹立し、海洋生物抽出物をスクリーニングした結果、HBVエンハンサーI 活性を抑制する海洋生物抽出物を見出し、スクリーニング系としての有用性を示すことが出来た。この結果は、申請書の実験計画通りに進んでいる。
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| Strategy for Future Research Activity |
160種の新たな海洋生物の抽出物を入手することが出来たので、今後はこれらの海洋生物抽出物について、Huh7GL4.18EnhI X-Pro_AeUS細胞を用いてHBVエンハンサーI抑制活性があるものを探索する予定である。更に、海洋生物抽出物から精製した化合物については、新たなものを入手することが出来たので、こちらについても検討する予定である。
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[Journal Article] Four Aromatic Sulfates with an Inhibitory Effect against HCV NS3 Helicase from the Crinoid Alloeocomatella polycladia.2017
Author(s)
Hermawan I, Furuta A, Higashi M, Fujita Y, Akimitsu N, Yamashita A, Moriishi K,Tsuneda S, Tani H, Nakakoshi M, Tsubuki M, Sekiguchi Y, Noda N, Tanaka J.
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Journal Title
Mar Drugs
Volume: 15
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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