2017 Fiscal Year Research-status Report
RNAiスクリーニング法にて同定された肝癌における新規癌関連遺伝子の機能解析
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16K09357
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
高井 淳 京都大学, 医学研究科, 特定助教 (80760587)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 肝癌抑制 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成28年度はGlobal RNAiスクリーニングの結果を参照し、EpCAM陽性肝癌細胞の維持に重要な遺伝子の候補としてPMPCBを選出し、PMPCB-shRNAがEpCAM陽性細胞の増殖を抑えること、PMPCBがミトコンドリア機能の維持に必須であることを示した。
平成29年度は、EpCAM陽性肝癌細胞株であるHuH1細胞およびHuH7細胞およびEpCAM陰性肝癌細胞株であるSK-Hep1細胞およびMHCC97細胞にPMPCB-shRNAを導入し、細胞死の有無について7-AAD染色を用いたflow cytometryで解析を行った。その結果、EpCAMy陽性の前者の2種類の細胞でのみ細胞死が認められ、EpCAM陽性細胞でのみPMPCB-shRNAがアポトーシスを誘導することが示唆された。
また、ルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだHuH1-ffluc2細胞にPMPCB-shRNAを導入し、ヌードマウスの皮下に移植して経過観察したところ、コントロール群と比較しルシフェラーゼのシグナルがPMPCB-shRNA導入群では明らかに減弱していた。また、皮下移植して8週後にマウスをsacrificeし腫瘍を解析したところ、PMPCB-shRNA導入群の腫瘍はコントロール群と比較し優位に小さく、TUNEL染色にて陽性細胞が多いことが分かった。以上より、PMPCB-shRNAはEpCAM陽性肝癌細胞にアポトーシスを誘導し、細胞増殖を抑えることがin vivoの解析でも明らかとなった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成29年度はPMPCB-shRNAがEpCAM陽性細肝癌細胞にどのようなメカニズムで関与しているのかについて、in vitro, in vivoの両面で検討を行うことを目標としていたが、いずれの検討でもPMPCB-shRNAがEpCAM陽性肝癌細胞特異的にアポトーシスを誘導することを示すことができたため、研究計画は概ね順調に進展しているものと考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成30年度は、PMPCBがEpCAM肝癌細胞の維持にどのように関与しているのか、その分子機構についてさらなる解析を行う予定である。
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