2016 Fiscal Year Research-status Report
内在性遺伝子ターゲッティング法を用いた肝癌におけるp53アイソフォームの機能解析
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16K09381
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| Research Institution | Aichi Medical University |
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Principal Investigator |
中尾 春壽 愛知医科大学, 医学部, 教授 (60326139)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
太田 明伸 愛知医科大学, 医学部, 講師 (30438048)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | p53 isoform / 肝細胞癌 / delta40p53 / delta133p53 / cellular senescence / tumor suppression |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度の研究計画に基づいて以下の研究を実施した。
１．p53スプライシングアイソフォームの機能を解析するためにCRSPR/Cas9システムを用いた遺伝子ターゲッティング法によりp53アイソフォームである△40p53および△133p53の内在性遺伝子改変肝細胞株を樹立した（p53 △40/△40、p53 △133/△133）。これらの内在性遺伝子改変肝細胞株はHepG2細胞株を用いて△40p53および△133p53の内在性遺伝子をhomoに破壊した肝癌細胞株である。
２．上記の２つのp53アイソフォームのうち、まず△40p53の機能を明らかにするためにp53 △40/△40、p53 △133/△133に加え、我々がこれまでに構築したp53 -/-、p53+/△40内在性遺伝子破壊肝細胞株、p53 wild type肝細胞株（親株）とp53のhot spotに点変異を導入したnegative strand vectorおよびsiRNA法を用いて標的遺伝子（△40p53）をノックダウンした外来性遺伝子導入により△40p53機能を①細胞増殖能、②細胞周期、③アポトーシスに関して解析した。
３．これらの解析により△40p53は、肝癌細胞において細胞増殖を抑制し、細胞老化を誘導することを世界で初めて明らかにし、J Cell Sci.で発表した。（J Cell Sci. 2017 ;130(3):614-625.）
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
１．平成28年度の計画通りにCRSPR/Cas9システムを用いた遺伝子ターゲッティング法によりp53アイソフォームである△40p53および△133p53の内在性遺伝子改変肝細胞株を樹立することができた。
２．△40p53の機能解析に関しては、計画通りに解析が進み、肝細胞癌における△40p53の機能を世界で初めて明らかにすることができ、論文発表をすることができた。（J Cell Sci. 2017 ;130(3):614-625.）
３．△133p53の機能解析も△40p53の解析と同様に進行中である。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成29年度の研究計画に基づき、△40p53および△133p53の機能と関連分子を探求するため、DNAマイクロアレイによる網羅的解析を行なう予定である。p53 △40/△40、p53 △133/△133に加え、p53野生型であるHuh1細胞株およびp53をノックアウトさせたHuh1細胞株においてUVによるinductionを加えたものと加えないものを検体として解析する予定である。
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| Causes of Carryover |
当該研究にかかわる論文（J Cell Sci. 2017 ;130(3):614-625.）の掲載費用の支払いが平成28年度の残金では不足したので研究者本人が立て替えて支払った。その掲載費用を捻出するためには平成28年度の残金と平成29年度の予算を合算する必要が生じたため次年度に平成28年度残金を繰り越した。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
研究者が立て替えた論文（J Cell Sci. 2017 ;130(3):614-625.）掲載料に用いる。
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[Journal Article] Δ40p53α suppresses tumor cell proliferation and induces cellular senescence in hepatocellular carcinoma cells2017
Author(s)
A Ota, H Nakao, Y Sawada, S Karnan, M Eahiduzzaman, T Inoue, Y Kobayashi, T Yamamoto, N Ishii, T Ohashi, Y Nakade, K Sato, K Itoh, H Konishi, Y Hosokawa, M Yoneda
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Journal Title
J Cell Sci
Volume: 130
Pages: 614-625
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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