胆道癌におけるFGFR阻害薬の薬剤耐性獲得機序の追求

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K09400
• Research Institution: Nagoya City University
• Principal Investigator: 宮部 勝之 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 助教 (00543985)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 林 香月 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (00405200) ; 内藤 格 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (30527750) ; 吉田 道弘 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 助教 (20636328)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 胆管癌 / FGFR阻害剤

Outline of Annual Research Achievements

我々はFGFR 阻害剤の薬剤抵抗性獲得に寄与する機序を解明し、腫瘍発生・進展メカニズムへの影響を検討することとし、最終的には本機序の臨床的意義解明を目的とした。
in-vitro実験として、FGFR2-CCDC6 癒合遺伝子を持つ肝内胆管癌primary cell であるLIV31 を使用し、FGFR 阻害薬BGJ398およびPonatinib耐性株を現在作製していたが、LIV31は増殖速度が極めて遅く、期限内の薬剤耐性株作成が困難と判断した。このため、今度は久留米大学病理学教室にMTA契約を通した共同研究を申し込み、当病理学教室にて作製された、FGFR高発現肝内胆管癌細胞株である、KMBC細胞株を譲り受け、FGFR阻害剤耐性株作製を目指すこととした。極少量のBGJ398およびPonatinibから徐々に濃度を上げて現在薬剤耐性株を作製中である。KMBCも市販されている胆管癌細胞株ほどrobustではなく、しばしば死滅してしまうことがあるものの増殖はLIV31よりはるかに速度が速く、薬剤耐性株を作製することが可能であると思われる。
同時に、in-vivo実験として、Mayo Clinicにて以前作製されたBGJ398薬剤感受性のpatient-derived xenograft (PDX)とBGJ398薬剤抵抗性のPDX、コントロールとしてvehicleのみ投与されたPDXよりDNAを抽出し、FGFR family geneを中心として遺伝子変異を調べるgene panel testを実施した結果によると、薬剤投与株では、コントロール群では検出されなかったある遺伝子の変異が検出された。この結果と共に、現在Copy Number Variation Analysisを同じ検体のDNAを使用して行うことになっており、結果が期待される。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

FGFR2-CCDC6 癒合遺伝子を持つ肝内胆管癌primary cellであるLIV31を使用し、FGFR 阻害剤耐性細胞株を昨年より作製していたが、本細胞は成長が極めて遅く、薬剤耐性細胞株を作製するのに予想外に時間がかかった。このため、LIV31を用いたFGFR耐性株作成は断念し、久留米大学医学部病理学講座の好意にて共同研究を申し込むことにより譲り受けたKMBC胆管細胞株を用いた薬剤耐性株作製に切り替えた。BGJ398およびPonatinibから徐々に濃度を上げて投与していく予定である。しかしながら、Mayo Clinicにて前研究者が作製したBGJ398薬剤耐性獲得PDXはまだ存在し、使用することができるため、現在Copy Number Variation Analysisを行う交渉を進めているところである。

Strategy for Future Research Activity

まずはCopy Number Variation (CNV）Analysisの結果を出すことに全力を挙げる。前回行った遺伝子パネルにて検出された、薬剤耐性株のみに検出された変異およびこのCNV分析の結果をもとに、薬剤耐性株作成後、in vitroの実験やin vivoの実験を通して検証を行っていく予定である。

Causes of Carryover

研究進行が遅れ、次年度も研究を行う必要が生じたため。