2017 Fiscal Year Research-status Report
肺癌での免疫細胞機能障害に関与するマイクロRNAの次世代シークエンサーによる探索
Project/Area Number |
16K09555
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Research Institution | Tokai University |
Principal Investigator |
青木 琢也 東海大学, 医学部, 准教授 (70255438)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高木 敦司 東海大学, 医学部, 教授 (30256101) [Withdrawn]
秦野 伸二 東海大学, 医学部, 教授 (60281375)
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Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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Keywords | マイクロRNA / 腫瘍免疫 / 次世代シークエンサー / 制御性T細胞 |
Outline of Annual Research Achievements |
進行肺癌根治例の当院での過去10年の検討から免疫系細胞の重要性が示唆された。microRNA (miRNA)は遺伝子発現制御機能を持ち、遠隔細胞に情報伝達が可能である。増悪・転移・治療効果と関連した免疫系細胞の変化を調べ、その細胞表面上の分子と細胞内のmiRNAを含むnon-coding RNA (ncRNA)およびサイトカインとエクソソーム中のmiRNAを解析する。また、miRNAの標的遺伝子をbioinformatics的手法で決定する。さらに、免疫抑制で極めて重要な制御性T細胞と、そのマスター転写因子であるFOXP3に影響するncRNAを探索する。以上により肺癌患者での免疫障害を網羅的に解析すると同時に、その障害の原因を遺伝子レベルから解明することを目的とした。 昨年度、血清エクソソームからのRNA抽出および白血球の分離・解析の条件を決定した。本年度は、臨床研究計画書および患者同意書を作成し、当院の臨床研究審査委員会に申請し、研究の実施が承認された。 研究対象者として、①細胞診あるいは組織診により非小細胞肺癌あるいは小細胞肺癌と診断が確定されている。②病期が決定された患者。③本人から同意を得られた者。これら①から③のすべてを満たす患者を対象とし、インフォームド・コンセントを実施後、血液約8ccを一般の採血と一緒に採血し、検体の収集を行っている。肺がん患者においては、概ね2か月おき(1-6か月の遅延を許容する)あるいは病状に変化がある場合に、採血を行っている。現在までに、30症例、47ポイントでの採血を行い、検体は、血漿および単核球に分離され、凍結保存を行っている。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
血漿からのRNA抽出および単核球の分離と解析の条件が決定され、臨床研究委員会に研究の実施の承認を得られたこと、また、患者から実際に検体の収集を開始していることは、本年度の大きな進展であった。しかしながら、収集スピードは、それほど速いものではなく、今後も収集の必要がある。さらに、実際の測定に進めていないことから、研究はやや遅れていると考えられる。
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Strategy for Future Research Activity |
1)肺癌患者および対照として、① 健常人 30例(20~90歳)、② 肺癌以外の呼吸器疾患で呼吸器内科を受診中の患者30例(20~90歳)から、更に検体を収集し、臨床情報も収集する。 2)単核球における細胞表面および細胞内発現系を、フローサイトメーターで測定し、monocyte, B cell, T cell, Treg cellの極性を解析・評価する。また、TrizolによりRNAを抽出しRNA発現解析も同時に行う。血漿に関しては、サイトカイン(IL-10, TGF-β, denosine, PGE2, Galectin-1等)をELISA等で測定する。 3)保存した血漿からエクソソームを分離し、Trizolを使用してRNAを抽出し、次世代シークエンサー用のライブラリー作成後シーケンシングする。RNA量が少ない場合は、RT-PCRにより解析する。 以上より、肺癌患者での免疫障害を液性因子および細胞性因子から網羅的に解析すると同時に、その障害の原因を遺伝子レベルから解明することが可能と考えている。
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Causes of Carryover |
本研究において、最も助成金を必要とするのは、次世代シークエンサーによる解析であると判断されること、および、それまでの研究では、検体の収集が中心であることから、次年度使用額が生じた。この助成金と翌年度分として請求した助成金とを合わせて、次世代シークエンサーを用いた、マイクロRNAの解析を行っていきたいと考えている。
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