2018 Fiscal Year Annual Research Report
Investigation on the endothelial-mesenchymal transition in lymphangioleiomyomatosis
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16K09589
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
瀬山 邦明 順天堂大学, 医学部, 先任准教授 (10226681)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 分子細胞呼吸器病学 / リンパ脈管筋腫症 / リンパ管内皮細胞 / 内皮間葉転換 / 内皮細胞増殖因子 / TSC遺伝子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
リンパ脈管筋腫症（LAM)患者の肺移植、病理診断時の胸腔鏡（VATS）下生検肺組織、肺癌患者の切除肺の非癌部正常組織から、FACSにてリンパ管内皮細胞（LEC)を分離・培養する方法を確立し、最終的に肺移植例のLEC（4例）、VATS肺生検のLEC（3例）、正常肺対照LEC (5例)を分離培養できた。これらの肺LECの内皮細胞用メディウム中での増殖特性を検討したところ、LAM移植肺LECの増殖は、LAMVATS生検LECや正常対照肺LECに比して約2倍の早く増殖した。次に、内皮細胞増殖因子であるVEGF-A、VEGF-C、VEGF-Dの各単剤や組み合わせ刺激に対する反応性を比較検討したが、ベースラインからの増殖反応性に3群のLECに差を認めなかった。増殖因子中ではVEGF-Aが最も強く増殖を促した。一方、遊走能の検討ではLAM移植肺LECでは正常対照に比べて約1.5倍に亢進していた。遊走能に対する価各増殖因子の効果を検討したところ、VEGF-CDやDは顕著に遊走を亢進させたが、ベースラインからの反応性は3群のLECで差がなかった。LECの代表的な機能タンパク質の発現を検討したところ、LAM移植肺LECでは正常対照に比べてLYVE-1の発現が約1/3へ有意に減少し、一方、VEGFR-3の発現が約3倍に亢進していた。LECの遺伝子発現をマイクロアレイ解析で網羅的に検討したところ、26,083解析遺伝子中744遺伝子（2.8%）が正常対照LECに比べ2倍以上の変化を示し（増加366遺伝子／減少378遺伝子）、遺伝子オントロジー解析ではcell migration関連遺伝子の変化が際立っていた。LAM移植肺から培養したLAM細胞やLECを安定して研究に使用できるようウイルスベクターを用いたhTERT遺伝子導入による細胞数樹立を試みたが、本年度は樹立に至らなかった。
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