ドライバー遺伝子異常肺癌の薬剤耐性機序における長鎖ノンコーディング RNAの意義

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K09592
• Research Institution: Nippon Medical School
• Principal Investigator: 清家 正博 日本医科大学, 医学部, 教授 (30366687)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 野呂 林太郎 日本医科大学, 医学部, 助手 (50366738)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 低分子RNA / 肺癌 / 薬剤耐性 / 分子標的薬 / ドライバー遺伝子 / トランスレーショナルリサーチ

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、肺癌のEGFR-TKI,ALK-TKI,MET-TKIなどの分子標的薬耐性と癌幹細胞(CSC)に関わるlncRNAの意義を明らかにし、分子標的薬耐性克服法の確立、根治を目指した臨床応用を目的とする。研究期間内には以下のことを明らかにする。本研究の大きな3本柱は、①EGFR-TKI,ALK-TKI,MET-TKI耐性およびCSC/EMTに関わるlncRNAの同定、②再発時の再生検(Re-biospy) 検体を用いたlncRNA発現の検証 ③候補lncRNAの機能解析と耐性克服法の開発である。昨年度、Afatinib、Osimertinibに対するEGFR-TKI耐性株、Crizotinib、Alectinib(A、Ceritinibに対するALK-TKI耐性株およびMET-TKI耐性株を樹立し、CSC/EMTの特徴を有することを確認した。これらの樹立した耐性株と親株およびEGFR-TKI自然耐性株を用いて、lncRNAアレイを用いた網羅的lncRNAプロファイリングを施行した。今年度は、バイオインフォマティクスの手法を用いて、耐性に共通して関与するlncRNAとしてCRNDEを同定した。またlncRNAデータベースを用いて、候補となるパートナーを検索し、IRX5を選出した。耐性株においてCRNDEとIRX5の発現上昇はqRT-PCRにて確認した。また、siRNAを用いたCRNDEとIRX5のノックダウンに成功し、現在機能解析を施行中である。候補lncRNAとパートナー蛋白質の同定に成功し、予定通リに研究は遂行されていると考える。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

分子標的薬耐性に関与する候補lncRNAとパートナー蛋白質の同定および発現の検証に成功し、予定通りに研究は遂行されていると考える。

Strategy for Future Research Activity

siRNAを用いた候補lncRNAとパートナー蛋白質であるCRNDEとIRX5のノックダウンに成功し、現在機能解析を施行中である。さらに、EGFR-TKI/ALK-TKI再生検検体におけるCRNDE、IRX5の発現の検証を予定している。

Causes of Carryover

今年後は計画通り、候補lncRNAの発現検証およびsiRNAを用いた機能解析の試薬購入を中心に使用した。次年度の機能解析および臨床検体を用いた研究に使用する予定である。