腎糸球体メサンギウム細胞とIgA1の相互作用および関連分子による修飾機構

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K09607
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 金子 佳賢 新潟大学, 医歯学系, 講師 (80444157)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 成田 一衛 新潟大学, 医歯学系, 教授 (20272817)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: インテグリン / トランスグルタミナーゼ

Outline of Annual Research Achievements

IgA腎症に特徴的とされるメサンギウム細胞へのIgAの沈着には、インテグリンα１およびα２を介していることが報告されている。そこでsiRNAを用いてインテグリンα１、α２ならびに、IgAの受容体として報告されているCD71をそれぞれ特異的にノックダウンしたメサンギウム細胞を用いて、IgAとの共培養によるメサンギウム細胞内の情報伝達物質を解析した。インテグリンα１欠損メサンギウム細胞では、コントロール用siRNAを反応させたメサンギウム細胞と同様に、IgAの添加によりERK 1/2、WNKをはじめとする各種情報伝達物質のリン酸化が認められたが、CD71欠損メサンギウム細胞ではこれらのリン酸化が減弱ないし消失しており、さらにインテグリンα２欠損メサンギウム細胞ではそのほどんどが消失していた。このことから、IgAによるメサンギウム細胞の情報伝達は、インテグリンα２を介したものであると考えられた。また、トランスグルタミナーゼ２は、インテグリン同士やインテグリンと細胞外基質を結合させる働きが報告されている。そこでトランスグルタミナーゼ２の発現をsiRNAを用いてノックダウンさせ、IgAと反応させたところ、コントロール用siRNAを反応させたメサンギウム細胞と比較してIgAの添加によるインテグリンα１、α２や細胞外基質の発現が抑制されており、IgAとインテグリンα２の結合にトランスグルタミナーゼ２が関与していることが推察された。また、CD71のリガンドであるトランスフェリンをIgAとともにメサンギウム細胞に添加したが、発現遺伝子に違いは見られなかった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

実験手技は概ね確立したものであるため。

Strategy for Future Research Activity

当初の予定通り、リコンビナントトランスグルタミナーゼ２を作成し、メサンギウム細胞にIgAとともに添加し、IgAとの反応性にどのような影響を及ぼすかを、発現遺伝子解析を行い検証する。また、IgA腎症患者血清より、IgAに対するIgG型およびIgA1型自己抗体を抽出し、メサンギウム細胞と共培養することによる発現遺伝子の違いを検証する。さらにトランスグルタミナーゼ２特異的合成基質ペプチドにFITC標識してプローブを作成し、ヒト腎生検組織においてインテグリンα1、α2、CD71と、トランスグルタミナーゼ２とのオーバーラップの比率と病理所見、臨床所見ならびに腎予後とを比較検討する

Causes of Carryover

次年度使用額は少額であり、購入できるものがなかったため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

次年度予算と合わせ、物品費に使用する。