2017 Fiscal Year Research-status Report
筋萎縮性側索硬化症における蓄積タンパク質切断因子の解明と除去による治療戦略
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16K09681
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| Research Institution | Teikyo University |
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Principal Investigator |
詫間 浩 帝京大学, 医学部, 講師 (00326258)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
桜井 正樹 帝京大学, 医学部, 教授 (30162340)
郭 伸 東京大学, 大学院医学系研究科(医学部), 客員研究員 (40160981)
玉岡 晃 筑波大学, 医学医療系, 教授 (50192183)
塩谷 彩子 筑波大学, 医学医療系, 講師 (60622735)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 筋萎縮性側索硬化症 / マイクロRNA / TDP-43 / 断片化 / 前頭側頭型認知症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
筋萎縮性側索硬化症（ALS）や前頭側頭型認知症（FTD）では、蓄積蛋白質TDP-43がそれぞれの疾患特異的な断片を形成して細胞質内に蓄積しており、部位特異的なニューロン死に関連していると考えられる。本研究ではALS発症に関与するRNA編集酵素であるADAR2、およびFTDに関与するグラニュリンの発現を阻害し発現するTDP-43を比較することにより、TDP-43断片化関連因子を同定しようとしている。
昨年度までにADAR2ならびにGRNの発現を抑制するsiRNAの最適な配列を決定した。また解析に用いるDNAマイクロアレイ、microRNAチップのためのマウス大脳皮質からの神経細胞体分取法およびFACSセルソーター条件を決定した。本年度はin vivoでの検討、siRNAを電気穿孔法によりマウス大脳に導入し解析の予定であったが、ヒト脳での検索を優先し、ヒト組織におけるmicroRNA発現を解析した。ALS、疾患対象各5例の凍結剖検脳を用い、運動野、小脳（対象）などの部位から50-100mgの皮質組織を分離し、microRNAを含むtotal RNAを回収した。前回課題において変異型TDP-43により特異的に変化すると考えられたmicroRNAについての知見を得ており、これらの一部について、前記ヒト組織でのmicroRNA量を定量PCRを用いて検討した。しかしながら現在までALSにおける特異的障害部位である運動野において、特異的に変化しているmicroRNAは検知できていない。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
siRNAをin vivoで導入し、マウス脳の解析を行う予定であったが、実際に導入を行うにあたり、導入効率が低く解析に至らなかった。このため早期にヒト組織での解析に転じたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
病因となりうるTDP-43に関連したmicroRNAの候補は既に得られているが、多くのものが得られたため絞りきれていない。このため新たな研究分担者の協力を得て、酵母を用いたスクリーニングを行なうこととした。これによりTDP-43断片化に関与するmicroRNA、mRNAの同定に邁進する。
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| Causes of Carryover |
（理由）
動物を使用した実験、DNAチップなどを用いた解析の遅延により当初予定より使用額が減少した。
（使用計画）
次年度は新たな実験系（酵母）を立ち上げることなどから試薬などの使用も増え、次年度使用額を使用する予定である。
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