2016 Fiscal Year Research-status Report
“パイオニア転写因子”IRF4を標的にした1型糖尿病の治療探索
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16K09756
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
阿比留 教生 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 准教授 (00380981)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
古林 正和 長崎大学, 保健・医療推進センター, 准教授 (00380874)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 1型糖尿病 / NODマウス / 転写因子 / T細胞代謝系 / IRF4 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1型糖尿病では自己免疫疾患であり，現在，免疫学的寛容誘導を目的とした治療開発が進められている．IRF4は，多面的な免疫担当細胞の“パイオニア転写因子”であり，その分化・増殖の最上流に位置する転写因子であることが報告された．我々は，1型糖尿病モデル；NODマウスを用いて，このIRF4が，用量依存性に主要な免疫細胞機能を制御し，１型糖尿病の病態へ関与していることを証明した．IRF4を標的とした治療法探索システムの開発のために，我々が作製したIRF4 KO NODマウスを応用する場合，問題点として，①in vitroの系で，T細胞の抗原特異的な免疫反応を評価出来ない，②糖尿病発症をエンドポイントにした場合，in vivoの系で長期間を要する点があげられる．今回，その問題を解決するために，NOD由来膵島抗原特異的なCD4+Ｔ細胞を主に発現するBDC2.5-TCR-NODマウスを利用し，マウスの交配により，IRF4 KO-BDC-2.5 TCR NODマウスを作製する．
今回、BDC2.5-TCR-NODマウス（The Jackson labo., Stock No: 004460）を入手し、既に作成したIRF-4遺伝子ホモNOD欠損マウスと交配した。さらに、Rag1KO-NODマウス（The Jackson labo., Stock No: 003729）も購入し、IRF-4遺伝子ホモNOD欠損マウスと交配した。両系統は、F1およびその3-4世代の交配により，IRF4 ホモ欠損(Irf4-/-)，ヘテロ欠損（Irf4+/-），野生型(Irf4+/+)BDC2.5-TCR-NODマウスあるいは，Irf4-/-，Irf4+/-，Irf4+/+-Rag1KO-NODマウスを作製中である。現在、3世代までの交配を終了し、作出したマウスの中から研究に使用する系統を選択している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2系統の遺伝子改変マウスBDC2.5-TCR-NODマウスとRag1KO-NODマウスにそれぞれに対し、IRF-4遺伝子ホモNOD欠損マウスとの戻し交配により、3世代交配を終了した。1世代3か月～4か月を予定しており、概ね順調に進捗している。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、計画しているマウスの系統を確立し、in vivo実験により、Irf4欠損BDC2.5-TCR-NODマウス由来の脾細胞からnaive CD4+T細胞を抽出し、Rag1KO-NODマウスへの養子移入、あるいは逆にBDC2.5-TCR-NODマウス由来の脾細胞からnaive CD4+T細胞を抽出し、Irf4欠損Rag1KO-NODマウスへの養子移入を行い、膵島炎や糖尿病進展について解析する。
また、in vitro実験により、IRF4欠損BDC2.5TCRNODマウス由来の、CD4+T細胞の抗原刺激による増殖反応やサイトカイン発現を確認後、細胞外フラックスアナライザーおよびメタボローム解析により、T細胞代謝系の変化を解析する予定である。
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