2017 Fiscal Year Research-status Report
アディポネクチンの新たな作用機序およびイメージング手法による生理動態解明
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16K09801
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
前田 法一 大阪大学, 医学系研究科, 寄附講座准教授 (30506308)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
西澤 均 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), その他 (20379259)
喜多 俊文 大阪大学, 医学系研究科, 寄附講座講師 (10746572)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | アディポネクチン / T-カドヘリン / GPI-PLD / メタボリックシンドローム / 動脈硬化 / 糖尿病 / 肥満 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（１）アディポネクチンのT-cadherinを介する抗動脈硬化作用・抗糖尿病作用の解明と生理動態解析
ApoE-KOマウスとT-cadherin欠損（Tcad-KO）マウスとの交配により、Tcad&ApoE-ダブルKO（Tcad&ApoE-DKO）マウスを作製し高コレステロール食を負荷した。Tcad&ApoE-DKOマウスは、ApoE-KOマウスに比して有意に動脈硬化が進展していた。頸動脈結紮モデルでも、Tcad&ApoE-DKOマウスは、ApoE-KOマウスに比して内膜・中膜比が有意に増加していた。以上、アディポネクチンはT-cadherinを介して抗動脈硬化作用を発揮することを明らかにした（FASEB J. 2017）。さらに、T-cadherinの細胞外ドメイン１～５をそれぞれ欠失させた変異を作製し、BIACOREを用いて検討した結果、細胞外ドメイン１及び２がアディポネクチンとの結合に必須のドメインであることを示した（JBC. 2017）。また、アディポネクチンとT-cadherinの結合解離定数KD値は1.0 nMであり、T-cadherinと結合する血清中タンパクとしてはアディポネクチンのみであることを明らかにした（JBC. 2017）。
（２）GPI-PLDを介するアディポネクチン蛋白の組織および血中レベルでの調節機構とその生理的意義
GPI-PLD欠損マウスを樹立し高脂肪高ショ糖食負荷を実施、主に耐糖能や脂肪肝に関して検討を進めている。
（３）生体イメージングを駆使したアディポネクチンの動態生理学の解明
アディポネクチンを蛍光標識したアデノウイルス（Ad-tdTomato-Adipo）を作製し、マウスに投与し生体イメージングを行ったところ、血管内に蛍光標識されたアディポネクチンを検出することが出来た。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
特に大きな問題もなく、マウスならびに細胞実験も当初の計画通り順調に進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
アディポネクチンのT-cadherinを介する抗糖尿病作用について、T-cadherin欠損（Tcad-KO）マウスに高脂肪高ショ糖食負荷やSTZ投与を行い、それぞれの糖尿病モデルにおいて検討を進めていく。アディポネクチンとT-cadherinの結合様式について、さらに分子レベルで検討を進め、共結晶解析を行えるレベルにまで結合に必須の部位を絞り込んでいく。
GPI-PLD発現アデノウイルスならびGPI-PLD欠損マウスを用いて、糖尿病や脂肪肝（NAFLD/NASH）とGPI-PLDとの関連を明らかにしていく。
蛍光標識されたアディポネクチンを用いて、in vitro及びin vivoにおけるアディポネクチンの動態を明らかにする。
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| Causes of Carryover |
平成２９年度は、マウスの生理実験が多く実験試薬に要する費用が少なかったため、次年度に繰り越すこととした。平成３０年度は、本助成の最終年度でもあり、本研究を仕上げていく上でより多くの動物実験費用ならびに実験試薬費用が必要となり、予定額よりも多くの支出が見込まれる。
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[Journal Article] Adiponectin association with T-cadherin protects against neointima proliferation and atherosclerosis.2017
Author(s)
Fujishima Y, Maeda N, Matsuda K, Masuda S, Mori T, Fukuda S, Sekimoto R, Yamaoka M, Obata Y, Kita S, Nishizawa H, Funahashi T, Ranscht B, Shimomura I.
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Journal Title
FASEB J.
Volume: 31
Pages: 1571-1583
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] The unique prodomain of T-cadherin plays a key role in adiponectin binding with the essential extracellular cadherin repeats 1 and 2.2017
Author(s)
Fukuda S, Kita S, Obata Y, Fujishima Y, Nagao H, Masuda S, Tanaka Y, Nishizawa H, Funahashi T, Takagi J, Maeda N, Shimomura I.
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Journal Title
J Biol Chem.
Volume: 292
Pages: 7840-7849
DOI
Peer Reviewed
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