2017 Fiscal Year Research-status Report
転写ネットワーク解析によるRunx1の造血制御メカニズムの解明
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16K09857
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
忠垣 憲次郎 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (30416268)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
奥田 司 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30291587)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 転写因子 / RUNX1 / 標的遺伝子 / 造血幹細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
当該研究ではこれまでに3種の候補標的遺伝子群を特定している。そこで本年度はこれら３種の候補標的遺伝子の転写がどのようなメカニズムによってRUNX1による制御を受けるのか検討を進めた。コンセンサス配列に結合しない一連の変異型RUNX1の発現ベクターと、RUNX1結合部位に変異を施した変異型ルシフェラーゼベクターを利用し、RUNX1転写因子の候補遺伝子プロモーター領域に対する作用について解析した。
まず３種の候補標的遺伝子それぞれのプロモーター領域の下流にルシフェラーゼ遺伝子を導入することによってレポーターコンストラクトを作製した。また、RUNX1結合配列に変異を導入してRUNX1が結合できない変異体プロモーターを作製し、これら変異型プロモーターの下流にルシフェラーゼ遺伝子を繋いだレポーターコンストラクトも作製した。これらのプラスミドと上述のRUNX1変異体とのさまざまな組み合わせを用いて、ヒト血球系培養細胞中の転写活性化能をルシフェラーゼアッセイにて検討した。
その結果、３種の候補標的遺伝子のプロモーター領域はRUNX1によっていずれも正方向に活性化された。重要なことに、RUNX1コンセンサス部位に結合しない変異型RUNX1を用いて同様にルシフェラーゼアッセイを行うと、３種とも候補標的遺伝子の転写は活性化されなかった。くわえて転写活性化ドメインを欠くRUNX1変異体をもちいて同様の検討を行なったが、ここでもプロモーターの活性化は観察されなかった。これらのことから、この3種の遺伝子群はいずれもRUNX1の転写標的であるものと考えられた。
現在、これらのプロモーター配列のRUNX1コンセンサス配列変異体のコンストラクトを用いて、こうした転写調節がRUNX1による直接的なものか、あるいは他の転写因子群との協調の上に成立しているものなのか検討を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
これまでの探索によって特定した３種の候補標的遺伝子群について、じっさいにRUNX1による転写制御を受けているのかどうか各種RUNX1変異体を用いたレポーターアッセイを用いて解析した。その結果、いずれもRUNX1の転写標的であるものと考えられた。今後はこの作用が直接この転写作用に影響を与える因子かどうかを検討してゆく。これら候補標的遺伝子３種がどのようにRUNX1機能と係るか解析することによって、造血幹細胞制御における重要な知見が得られるものと期待している。
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| Strategy for Future Research Activity |
標的遺伝子群のプロモーター配列中のRUNX1コンセンサス配列に変異を入れたコンストラクトを用いて、今回見出された転写調節がRUNX1による直接的なものか、あるいは他の転写因子群との協調の上に成立しているものなのか検討を進めてゆく。もしもRUNX1作用が他の分子を介した間接的なものである可能性が示唆された場合は、この転写作用に影響を与える因子がどのような分子なのかなどについて検討を開始し、近傍に結合する他の造血関連転写因子群との機能協調や転写ネットワークの解明を試みたい。同時に候補標的遺伝子の発現状況について、RNAレベル、タンパクレベルで検討したい。さらに、これらのRUNX1標的がどのような生理作用を持つのかについての解明も試みたい。まずはES細胞と候補標的遺伝子ノックダウン系を用いて、細胞の分化能力及び増殖能力を評価するコロニー形成法で手がかりを掴みたい。
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[Journal Article] The orphan GPR50 receptor promotes constitutive TGFβ receptor signaling and protects against cancer development.2018
Author(s)
Wojciech S, Ahmad R, Belaid-Choucair Z, Journe AS, Gallet S, Dam J, Daulat A, Ndiaye-Lobry D, Lahuna O, Karamitri A, Guillaume JL, Do Cruzeiro M, Guillonneau F, Saade A, Clement N, Courivaud T, Kaabi N, Tadagaki K, Delagrange P, Prevot V, Hermine O, Prunier C, Jockers R.
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Journal Title
Nature Communications
Volume: 9 (1)
Pages: 1216
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Importance of the second extracellular loop for melatonin MT1 receptor function and absence of melatonin binding in GPR50.2017
Author(s)
Clement N, Renault N, Guillaume JL, Cecon E, Journe AS, Laurent X, Tadagaki K, Coge F, Gohier A, Delagrange P, Chavatte P, Jockers R.
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Journal Title
British Journal of Pharmacology
Volume: -
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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