2017 Fiscal Year Research-status Report
網羅的遺伝子解析をとおして同定した家族性白血病原因遺伝子の機能解析
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16K10032
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| Research Institution | University of Miyazaki |
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Principal Investigator |
盛武 浩 宮崎大学, 医学部, 教授 (40336300)
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2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 白血病 / 小児 / ETV6遺伝子 / MLL遺伝子 / 生殖細胞変異 / 家族性 / エクソーム解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
白血病発症に関する責任遺伝子同定を目的に１家系のMLL遺伝子再構成陽性兄妹の白血病細胞を対象にRNAシーケンス法によるキメラ遺伝子スクリーニング、寛解期検体を対象に次世代シーケンサーによる全ゲノム解析を施行し、得られた結果を元に詳細なドライ解析を行ったが責任遺伝子を想定させる変異をみだすことはできなかった。
ETV6-RUNX1キメラ遺伝子陽性一卵性双生児に見出した新規ETV6生殖細胞変異の機能解析として、A) 転写因子ETV6が有する転写抑制活性が新規ETV6変異ではどのように変化するか、B) 新規ETV6変異によって正常造血能がどのように変化するのか検討を行った。
まず転写抑制活性を評価した。ETV6下流遺伝子であるMMP3やPF4のプロモーター領域を用いて野生型ETV6、 既知ETV6変異、新規ETV6変異をそれぞれ遺伝子導入し、ルシフェラーゼアッセイにより転写活性を評価したところ、既知の変異株で生じる転写抑制障害を認めず野生型と同様の抑制活性を保有していたため、別の遺伝子であるTRAF1でも検討したが転写抑制障害は認めなかった。今回認めたETV6生殖細胞変異はETV6転写因子としての機能への影響は大きくないと想定された。
次に造血能を評価した。マウス造血幹細胞分画（LSK）に変異遺伝子を導入しフローサイトメトリーで評価したところ、野生型と比較してGr1陰性Mac1陰性分画減少を認めた、巨核球より上流の分化段階が障害されている可能性が示唆されたため、マウスLSK分画に野生型ETV6, 変異型ETV6を遺伝子導入後に放射線照射免疫不全マウスへの移植実験を行った。野生型ETV6、変異型ETV6ともに生着後から徐々にキメリズムが低下し生着維持や再構築能の障害が疑われた。
以上の解析結果から新規ETV6変異は転写抑制活性および造血分化能に関する明らかな障害機構は同定できなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
網羅的ゲノム解析を追加した1家系の詳細なドライ解析を行ったが結果には結びつかなかった。機能解析に関しては計画したとおりに進める事ができたものの造血障害や分化障害を示唆する結果は得られなかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
MLL遺伝子再構成陽性兄妹に関して、全ゲノム解析から発症を促進させる原因遺伝子の同定を進めていく。機能喪失型の候補遺伝子に関してはsgRNAライブラリーを用いて遺伝子発現を抑制することでMLL白血病発症が促進するクローンを同定する。変異型ETV6に関しては白血病発症やリンパ球分化に与えるバイアスについて検討する。具体的にはETV6-RUNX1キメラ遺伝子と共発現させることで変化が生じるか解析する。
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| Causes of Carryover |
1家系に計画していた追加の網羅的ゲノム解析には予算が足らず施行しなかったため。
次年度のマウスを用いる実験で使用予定である。
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