2018 Fiscal Year Annual Research Report
Functional analysis of causative genes identified by comprehensive genetic analysis
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16K10032
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| Research Institution | University of Miyazaki |
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Principal Investigator |
盛武 浩 宮崎大学, 医学部, 教授 (40336300)
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2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 白血病 / 小児 / ETV6遺伝子 / 生殖細胞変異 / 家族性 / エクソーム解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
新規ETV6変異の機能解析のため、ETV6標的分子であるEGR1, TRAF1についてレポーターアッセイと遺伝子発現解析を行った。Hela細胞にETV6野生型と新規ETV6変異型の発現ベクターおよびEGR1, TRAF1プロモーターベクターを導入し、ルシフェラーゼ活性を測定したところ野生型と新規変異型では有意差は認めなかった。さらに、野生型と新規変異型を導入したHela細胞から定量的PCR法で遺伝子発現を比較したがEGR1, TRAF1いずれも発現量に差は認めなかった。
次に、マウス造血再構築における新規ETV6変異の機能解析のため、5-FUを腹腔内投与したドナーマウスから骨髄前駆細胞を採取しGFP標識されたレトロウイルスベクターを用いてMock、ETV6野生型、新規ETV6変異型を導入した。レトロウイルスベクター感染後48時間後、X線10Gyを照射したレシピエントマウスに経静脈的に感染骨髄細胞を移植した。移植後12週まで末梢血およびGFP陽性細胞の割合を評価した。4,8,12週で白血球数、赤血球数、ヘモグロビン、血小板数に有意な差は認めなかった。さらに末梢白血球分画をGr1, Mac1, B220, CD3の推移で評価したがいずれの分画においてもMockおよび野生株との間に有意な差は認めなかった。これらの結果から、新規ETV6変異単独では白血化に関わるリンパ球分化へのバイアスや血球増多には関与しないことが明らかとなった。また、既報告ではETV6変異では血小板分化障害をきたすことが示されているが、コロニーフォーメーションアッセイの結果と同じくマウス造血においても血小板産生能は保たれており、臨床的に同患者の血小板値が保持されていることと合致する所見であった。今後は、白血病発症に関与するか検討するためETV6-RUNX1との相互作用と白血病発症促進効果の検討を行う予定である。
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