2017 Fiscal Year Research-status Report

好中球機能からみた炎症性皮膚疾患の病態解明とその治療法の確立

Research Project

Project/Area Number	16K10130
Research Institution	Kagoshima University
Principal Investigator	東裕子鹿児島大学, 医歯学域医学系, 准教授 (00381179)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	山口宗一鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (20325814)
Project Period (FY)	2016-04-01 – 2019-03-31
Keywords	好中球 / miRNA
Outline of Annual Research Achievements	好中球性皮膚疾患の病態に関わる好中球の働きをmiRNAの側面から解明するために、本年度はmiRNAプロファイリングを行った。集積した好中球性皮膚疾患患者3例とコントロール疾患患者3例から倫理委員会で認定されたプロトコールにしたがって血清を採取し、患者群のカラム吸着治療前と治療後、コントロール群の３群（3群ｘ3人＝計9検体）についてmiRNAの網羅的解析を行った。解析に用いた約2500 miRNAの中で、およそ500種類のmiRNAで発現量に有意差を認めた。この中から、差の大きい5種類のmiRNAを選択して、それぞれreal time PCR (Taqman PCR)を用いて定量的に発現量を測定したところ、網羅的解析で得られた結果と同様の傾向がみられた。解析に用いた3例の患者検体の他の症例でも同様の検討を行い、好中球性皮膚疾患特異的に発現しているmiRNAや、治療効果とともに発現量が減少するmiRNAが確認できた。特に、好中球で発現が確認されているいくつかのmiRNAは、治療前に増加し治療後に減少する傾向がみられた。次年度は、本年度得られたmiRNAのデータをもとに、さらに様々な皮膚疾患について同様の検討を行っていく。また、in vitroの培養系の実験では、薬剤により好中球様細胞に分化させたHL-60を用いて、種々の炎症刺激（TNFalpha, IL-17など）を加えたのちに、同定したmiRNAが変化するかを検討していく。そのうえで、重要度の高いmiRNAの発現を細胞内で増減させて、細胞の形態変化、性状変化を調べていく予定である。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason miRNAの網羅的解析が終了し、好中球の機能解析へと研究が進んでいるため。
Strategy for Future Research Activity	本年度は、miRNAのプロファイリングにより数個に絞り、増減の確認作業を行った。次年度は、miRNAの網羅的解析をもとに、さらに変化するmiRNAの数を増やして検討を行う。また、乾癬のみならず、様々な皮膚疾患に対象疾患を広げて、同様の検討を行っていく。また、in vitroの培養系の実験では、薬剤により好中球様細胞に分化させたHL-60を用いて、種々の炎症刺激（TNFalpha, IL-17など）を加えたのちに、同定したmiRNAが変化するかを検討していく。重要度の高いmiRNAに関してはその発現を細胞内で増減させて、細胞の形態変化、性状変化を調べていく予定である。乾癬は、好中球の関連する病態が提示されているが、その発症機序をmiRNAの視点から明らかにすることにより、治療応用に展開できる可能性がある。