2016 Fiscal Year Research-status Report
Investigation of personalized medicine for melanoma and mechanism of drug resistance using circulating tumor cells.
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16K10149
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
木庭 幸子 信州大学, 学術研究院医学系(医学部附属病院), 講師 (20436893)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
奥山 隆平 信州大学, 学術研究院医学系, 教授 (80292332)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | メラノーマ / 循環腫瘍細胞 / PD1抗体薬 / CTLA抗体薬 / 分子標的薬 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【当該年度の研究目標】 １．循環腫瘍細胞（以下CTC）におけるメラノーマ特異的な分子異常の網羅的解析 ２．ターゲットセラピーにより変化するCTCの数的および質的解析
【研究の実施状況】 １．CTCの癌遺伝子／癌抑制遺伝子の分子異常の網羅的探索：まず分取した腫瘍循環細胞のシングルセル12個および，対照として白血球６個 からDNAを抽出した．これらを個々にwhole genome amplificationを行った．その後のエマルジョンPCRとシークエンシングはタカラバイオに委託した．データの解析を行ったところ，メラノーマに一般的にみられる変異として，PI3KやRASの変異が検出された．その一方で，サンガー法で認められたBRAF V600E変異が検出できなかった．
２．Target therapyにより変化するCTCの数的解析 （木庭，奥山，実験助手）：①数的変化の解析として，治療前・治療後１ヶ月後・３ヶ月後・６ヶ月後のタイムポイントで末梢血を採取保存し，染色の後，セルアナライザーでCTCの数的変化を調べた．メラノーマの病勢マーカーであるLDHや5-S-CDと連動して，CTC数が変化することを確認した．
【課題と今後の計画】 シングルセルを用いた網羅的癌特異的遺伝子解析を行ったが、その過程で施行したゲノム増幅が不均一となったため、次世代シーケンサーの解析に、ばらつきがみられた．解析の改善のために、ゲノム増幅の均一性を担保できる増幅用の試薬キットを試しているところである．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
シングルセルを用いた網羅的癌特異的遺伝子解析を行ったが、その過程で施行したゲノム増幅が不均一となったため、次世代シーケンサーの解析に、ばらつきがみられた。そのためH28年度に予定していた癌の網羅的ホットスポット解析を行うことができず、やや遅れていると判断される。
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| Strategy for Future Research Activity |
CTCの経時的変化について，治療のモニタリングに有用であるか検証するため，より多くの患者での解析を行う．現在，５名以上の患者から血液を治療前，治療後２週間，以後は１ヶ月毎に採取している．メラノーマの薬物療法の選択肢が増えているため，PD1抗体薬，CTLA抗体薬，分子標的薬それぞれ３－４名ずつを解析対象として，さらに患者数を増やす計画である．
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| Causes of Carryover |
本年度の計画にあったwhole genome amplificationが、質的に不十分だったため、解析が進まなかったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度使用額は平成29年度請求額と合わせて、解析の改善のためにゲノム増幅の均一性を担保できる増幅用の試薬キットを試し、解析をすすめるために使用する。
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Research Products
(1 results)
