2016 Fiscal Year Research-status Report
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16K10172
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| Research Institution | Jichi Medical University |
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Principal Investigator |
小宮根 真弓 自治医科大学, 医学部, 准教授 (00282632)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | ＩＬ－３３ / 表皮細胞 / 有棘層 / トランスジェニックマウス / 皮膚炎 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
インボルクリンプロモーター下にマウスＩＬ－３３を発現するベクターを構築した。まず、正常ヒトケラチノサイト、ＨａＣａＴ細胞およびＨＥＫ２９３細胞にベクターをトランスフェクトし、ＩＬ－３３発現をウェスタンブロットにて確認した。トランスジェニックマウス作成は外注にて施行した。まず、Ｂａｌｂ／ｃマウス受精卵200個に発現ベクタ―をインジェクションし、マウス卵管内に移植した。仔マウスが得られなかったため、さらにＢ６マウスの受精卵200個に発現ベクターをインジェクションし、Ｂ６マウス卵管内に移植したところ、Ｂ６マウスの仔マウスが29匹得られたため、尾の組織からＤＮＡを抽出してタイピングを行った。
29匹のファウンダーマウス（Ｆ０）うちＩＬ－33トランスジェニックマウスは6匹ですべて成長過程で死亡した。繁殖可能週齢まで成長したマウスは21匹ですべて野生型であった。死亡したＩＬ－３３トランスジェニックマウス皮膚から切片を作成して、ＩＬ－３３抗体にて免疫染色したところ、有棘層に発現を認めた。また、死亡したＩＬ－３３トランスジェニックマウスおよび野生型マウスの各臓器からＲＮＡを抽出してＩＬ－３３発現を検討したところ、トランスジェニックマウスの皮膚で高い発現を認めたことから、インボルクリンプロモーター下に予想通りＩＬ－３３が強制発現されているものと考えられた。さらに、1週、2週、4週と、週齢が進むにしたがって皮膚におけるＩＬ－３３発現が上昇することが確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
保有しているＩＬ－３３ノックアウトマウスがＢａｌｂ／ｃであるため、トランスジェニックマウスもＢａｌｂ／ｃで作成したかったが、Ｂａｌｂ／ｃでは仔マウスが得られなかった。次にＢ６マウスで試したところ、仔マウスが得られたが、トランスジェニックマウスはすべて成長過程で死亡し、繁殖できず、交配ができなかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
①今後、もう少しＢ６マウスでトランスジェニックマウス作成を試みる。外注ではなく、自施設の実験動物センターにて作成をすることで、成長過程においても詳細に検討できるようにする予定である。
②また、ＩＬ－３３の有棘層での発現が致死的である可能性を考慮し、成長後に発現誘導できるシステムを構築することを計画している。
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| Causes of Carryover |
トランスジェニックマウスが計画した通りに作出できなかったため、研究計画に遅れが生じたため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
来年度に、トランスジェニックマウスの作成方法について変更を加えて再度トランスジェニックマウスの作出を試みるために、次年度分を使用する。
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Research Products
(11 results)
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[Journal Article] Apremilast, an oral phosphodiesterase 4 inhibitor, in the treatment of Japanese patients with moderate to severe plaque psoriasis: Efficacy, safety and tolerability results from a phase 2b randomized controlled trial.2017
Author(s)
Ohtsuki M, Okubo Y, Komine M, Imafuku S, Day RM, Chen P, Petric R, Maroli A, Nemoto O.
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Journal Title
Journal of Dermatology
Volume: 44
Pages: 873 884
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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