Maspin が乳癌患者の不良予後に関与する分子機構の解明

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K10458
• Research Institution: Tottori University
• Principal Investigator: 梅北 善久 鳥取大学, 医学部, 教授 (80244226)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 坂部 友彦 鳥取大学, 医学部, 助教 (50639747)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 細胞浸潤 / 細胞増殖 / 細胞内局在 / アンプリコンシークエンス

Outline of Annual Research Achievements

乳癌におけるmaspinの核移行破綻による細胞質局在化の原因を明らかにし、細胞質局在型maspinが乳癌の発生・進展にどのように関わっているかを解明する為に、本年度は以下の検討を行った。
① 正常乳腺上皮細胞株 (MCF10A)、乳癌細胞株 (MCF7、MDA-MB-231、MDA-MB-453)におけるmaspin mRNA、タンパク発現を解析し、乳癌細胞株におけるmaspin発現は、MCF10Aと比較して低下しているが、過去の報告と異なりmaspin発現の消失は認めないことを明らかにした。さらに、細胞内局在を検討し、MCF10Aでは細胞質及び核に発現しているmaspinが、乳癌細胞株では大部分が細胞質に発現していることを明らかにした。
② 過剰発現ベクターを用いた検討の結果、MCF10Aでは導入maspinが細胞質及び核で発現していたが、乳癌細胞株では大部分が細胞質のみで発現しており、乳癌におけるmaspin細胞局在制御機構の破綻が示唆された。
③ MDA-MB-231においてmaspin過剰発現による細胞増殖能、細胞浸潤能の亢進、maspin発現抑制による細胞増殖能、細胞浸潤能の低下が認められた。この結果から、一部の乳癌細胞株では細胞質局在型maspinが細胞増殖、細胞浸潤能の亢進に関与していることが示唆された。
④ 乳癌患者のmaspinゲノム解析を行う為に、核及び細胞質にmaspinを発現する患者2例と細胞質にmaspinを発現する患者2例のホルマリン固定パラフィン包埋ブロックからゲノムDNAを抽出し、TruSeq Custom Amplicon Low Input Kit (Illumina)を用いた次世代シークエンサーによるゲノム変異解析を実施した。現在、得られたデータの解析中である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

癌細胞における細胞質局在型maspinは、細胞増殖能および細胞浸潤能を亢進させることによって腫瘍の悪性度や転移を促進していることを示唆する結果が、乳癌細胞株を用いた検討により得られた。これらの実験結果は、これまで申請者が報告してきた臨床病理学的検討結果と一致するものであり、細胞質局在型maspinの乳癌進展に関わる分子メカニズムの一端であると推測される。また、核移行シグナル探索の為の次世代シークエンスを用いたゲノム変異解析についても実施できていることから、計画はおおむね順調に進展していると思われる。

Strategy for Future Research Activity

① 次世代シークエンスを用いたamplicon sequenceにより得られたデータを用いてmaspin核移行シグナル、癌細胞における変異の有無を解析する。
② 共免疫沈降、質量分析を用いてmaspin結合タンパク及び核内輸送タンパクの同定を行う。
③ 細胞質局在型maspinが細胞浸潤能を亢進させる分子メカニズムを、乳癌細胞株、乳癌モデルを用いて解明する。

Causes of Carryover

次世代シークエンス解析に要した費用が、当初見積もりより安かったために、次年度使用額が生じることになった。

Expenditure Plan for Carryover Budget

次年度に使用する予定になっている消耗品費の中で、特に培養実験関連の消耗品費に充てる予定である。