2017 Fiscal Year Research-status Report
高転移性乳癌細胞は転移抑制性miRNAsをexosomeに内包して細胞外に捨てる
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16K10482
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| Research Institution | Osaka Medical College |
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Principal Investigator |
伊藤 裕子 大阪医科大学, その他部局等, 功労教授 (40148432)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柴田 雅朗 大阪医科大学, 医学部, 准教授 (10319543)
Eid NabilA.S. 大阪医科大学, 医学部, 講師 (50570165)
濱岡 仁美 (黒瀬仁美) 大阪医科大学, 医学部, 講師 (80545608)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 高転移性乳癌 / exosome / miR27b / VEGF-C / hypoxia |
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| Outline of Annual Research Achievements |
高転移性のマウス乳癌細胞(BJMC3879)と低転移性(BJMC338)のMVsには、ともにprecursor VEGF-Cが同程度発現していた。BJMC3879ではVEGF-Cの受容体であるVEGFR3を発現しているため、autocrine的にMVsのVEGF-Cを利用でき、増殖していると考えられた。今回、VEGF-Cを調節するmiRNAに注目した。BJMC3879ではVEGF-Cを抑制的に調節するmiR-27bをMVsにて排出していると想定された。乳癌などの固形癌では、低酸素状態であると想定されている。そこで、normo.とhypo.で細胞内およびMVsに内包されるVEGF-C, miR-27bを比較検討した。normo. でVEGF-C の発現はBJMC3879において、細胞内、MVsともに高かった。Hypo.でBJMC3879の細胞内VEGF-C発現はnormo.とほとんど変わらなかった。BJMC338では細胞内の成熟型VEGF-C発現は低く、MVs内のprecursor VEGF-Cも低かったが、hypo.では成熟型VEGF-Cが減少していた。MVsにおける発現はBJMC3879と同程度に認められた。miR-27bの発現はBJMC338ではhypo.で細胞内の発現量が有意に増加するが、BJMC3879では差がなかった。一方、MVs内のmiR-27bの発現は両者でnormo.と比較して有意に増加おり、BJMC3879で高かった。しかし、BJMC338ではnormo.と比較して増加率はBJMC3879よりも大きかった。HIF-1αの発現を検討すると、BJMC3879ではhypo.で増強していた。また、VEGFR3の発現もhypo.で増強していた。以上の結果は「高転移性のマウス乳癌細胞ではVEGF-Cを抑制的に調節するmiR-27bをMVsにて排出している」と言う想定を支持し、miR-27b排出による抑制の減少、HIF-1αによるVEGF-Cの発現誘導により、VEGF-Cの発現が増強、さらにautocrineによるMVs内VEGF-Cの利用と相まって、hypoxia下でも増殖、転移していると考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
miR-27bとVEGF-C発現の変化が一致していたので,仮定は正しく研究は進んでいると言えるが、miR27bの遺伝子導入ができていないから。
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| Strategy for Future Research Activity |
１）２種類の乳癌細胞にmiR-27bをnormoxiaとhypoxiaで過剰発現させ、Western blot にてVEGF-Cの発現変化を検討する
２）VEGF-Cの系が細胞に変化を及ぼしているか、Akt, phosphoAktの発現を確認する
３）HIF-1αによるVEGF-C誘導とmiR-27bの関与を検討する
４）移植腫瘍におけるmiR-27bの発現を移植腫瘍のパラフィン切片よりRNAを抽出して、RT-PCRを行い、in vivoでの発現を確認する。
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| Causes of Carryover |
設備備品として申請したネッパジーンのスーパーエレクトポレーションNEPA21, typeIIは2,000,000円と高額で購入できなかったので、他の方法を選択しているため。導入薬で行っている。導入する遺伝子が増えたことも理由のひとつとなっている。
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[Journal Article] A novel combination RNAi toward Warburg effect by replacement with miR-145 and silencing of PTBP1 induces apoptotic cell death in bladder cancer cells2017
Author(s)
Takai T., Yoshikawa Y., Inamoto T., Minami T., Taniguchi K., Sugito N., Kuranaga Y., Shinohara H., Kumazaki M., Tsujino T., Takahara K., Ito Y., Akao Y., and Azuma H.
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Journal Title
Int. J. Mol. Sci.
Volume: 18
Pages: 179
DOI
Peer Reviewed
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