Mechanism of a new cancer treatment targeting TLR7

2018 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16K10531
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 上原 圭介 名古屋大学, 医学部附属病院, 病院講師 (50467320)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 梛野 正人 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (20237564) ; 横山 幸浩 名古屋大学, 医学系研究科, 寄附講座教授 (80378091) ; 國料 俊男 名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (60378023) ; 山口 淳平 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (00566987)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: TLR7 / Danger signal

Outline of Annual Research Achievements

TLR7阻害剤であるODN20958での抗腫瘍効果（運動能、浸潤能）に関して十分な抑制効果の確認ができなかった。再度ヒト大腸癌細胞株（DLD1）、ヒト膵癌細胞株（KLM1、Panc1）、ヒト胆管癌細胞株（HuCCT1）に対してODN20958を0.1μM、0.05μM、0.01μMにて投与し、運動能（スクラッチアッセイ）、浸潤能（インベーションアッセイ）について検討した。その結果、運動能、浸潤能への関与を認めなかった。ヒト大腸癌細胞株（DLD1）、ヒト膵癌細胞株（KLM1、Panc1）、ヒト胆管癌細胞株（HuCCT1）に対してイミキモドを10、5、2.5、1.25、0.6μMを投与し、蛍光染色による細胞死の過程の経時的な観察およびMuse Annexin V & Dead Cell kitを用いてアポトーシス誘導能についても検討した。TUNEL法ではイミキモド5μMの投与により48時間後にアポトーシスを認めていたが、Muse Annexin V & Dead Cell kitでは投与12時間後にearly apoptosisが出現していた。
アポトーシスの原因として小胞体ストレスの関与を考えた。ヒト胆管癌細胞株（HuCCT1）に対してイミキモドを5、2、1μMを投与し、非投与群と各投与群における小胞体ストレスのマーカーであるPERK(PKR-like ER kinase)およびBiP(immunoglobulin heavy chain-binding protein)の発現について検討した。PERKの発現はイミキモド投与によって変化しなかったが、BiPはイミキモド5μMの投与により発現が亢進していた。TLR7阻害による細胞死が小胞体ストレスである可能性が示唆された。