2016 Fiscal Year Research-status Report
転写因子KLFによる消化器癌浸潤、転移制御機構の解明と新規治療法の開発
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16K10564
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
酒井 望 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (70436385)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高野 重紹 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (20436380)
高屋敷 吏 千葉大学, 大学院医学研究院, 助教 (30456024)
久保木 知 千葉大学, 大学院医学研究院, 助教 (50571410)
吉富 秀幸 千葉大学, 大学院医学研究院, 講師 (60375631)
宮崎 勝 国際医療福祉大学, 大学病院, 教授 (70166156)
賀川 真吾 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (90507302)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 転移性肝癌 / 浸潤 / EMT / KLF |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、癌転移制御のkey moleculeとして我々がこれまでに研究を行ってきたケモカインレセプターCXCR4の上流調節因子としての転写因子Krüppel-like factor (KLF) familyに注目し、原発巣から他臓器転移形成過程における細胞増殖、浸潤、遊走能、EMT、METとの関連を明らかにするためin vivo、in vitro、臨床手術検体を用いた実験を立案し、開始している。
①in vitro：癌細胞株の増殖、遊走、浸潤能、EMTに対するKLF5、17の役割について3D culture、invasion assay, sphere formation assay等により in vitroでの機能解析を行う。②in vivo：①の結果に基づき、マウス大腸癌モデル、肝転移モデルを作成しKLF5、17の働きを過剰発現、knock down両方の実験系で解析する。原発巣の腫瘍径、転移巣での個数、径を比較検討。CXCR4を含めた下流の分子の変化についてmRNA、タンパクレベルで検討しin vivoでの機能解析を行う。また、血液サンプルを採取しCTC数、マーカーの発現を調べる。③clinical：転移性肝腫瘍ならびに周囲肝組織におけるKLF family（特にKLF5、17）の発現と予後を含めた臨床病理学的因子との相関を明らかにする。
平成28年度は、大腸癌細胞株を用いてKLF5、KLF17の発現制御をTet-On/Tet-Off systemにて行い、種々の実験を行う予定であったが、発現制御の効率が安定せず、一定の結果を得るまでに至っていない。並行して臨床サンプルを用いて免疫染色によるKLF5、KLF17の発現の検討を開始することとし、現在染色結果の検討を行っている。染色による発現レベルのscore化を行い、臨床データとの相関を検討中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
大腸癌細胞株を用い、KLF5、KLF17の発現制御を行った上で種々の実験を行う予定としていたが、発現制御の効率が安定せず、当初予定していたTet-On/Tet-Off systemの条件の検討に加え、Lipofectamine（Invitrogen）によるtransfectionを用いたtransientのoverexpression、RNAi法によるknockdown等による発現制御も行い、より良い条件設定を試みているため予定よりも進行が遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初予定していたTet-On/Tet-Off systemの条件の検討に加えLipofectamine（Invitrogen）によるtransfectionを用いたtransientのoverexpression、RNAi法によるknockdownなど代替の手法によるKLFの発現制御を安定させ、その後の実験を速やかに進行させる。また、臨床サンプルを用いた免疫染色によるKLF5、17の発現と臨床病理学的因子、予後等との相関についても並行して進行させる。
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| Causes of Carryover |
当初学会参加費、旅費等として計上していた予算が学会参加日程等の変更により実際の出費額が低くなり、余剰が生じた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
余剰分は次年度に繰り越し、in vitro実験の消耗品(medeium等）の購入に充当する計画である。
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