2018 Fiscal Year Annual Research Report
Two types of monoclonal antibodies generated by immunizing mice with MIA-PaCa-2 human pancreatic cancer cell line for diagnostic and therapeutic strategies for pancreatic cancer
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16K10595
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| Research Institution | Shimane University |
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Principal Investigator |
田島 義証 島根大学, 学術研究院医学・看護学系, 教授 (20264228)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
浦野 健 島根大学, 学術研究院医学・看護学系, 教授 (70293701)
西 健 島根大学, 学術研究院医学・看護学系, 助教 (80538893)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 膵がん / モノクローナル抗体 / バイオ医薬品開発 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者らは、バイオ医薬品開発を目指して、ヒト膵がん細胞株MIA PaCa-2を免疫源として、がん細胞表面を認識するマウスモノクローナル抗体を産生する３種類のハイブリドーマを樹立した。なかでも12-13.8は１）ヒトがん組織を用いた免疫組織学的解析でがん細胞表面を特異的に染色し、２）その染色強度は肺がんおよび膵がん患者の予後と相関していた。３）担がんモデルマウスにおいて、同標識抗体の腫瘍部への集積、４）同抗体修飾抗腫瘍薬内包リポソームによる腫瘍増殖抑制効果を有することを確認した。
12-13.8の抗原分子を同定する目的で免疫沈降産物のトリプシンおよびトリプシン以外のタンパク質分解酵素を用いた断片化による質量解析を行ったが、抗原の同定には至らなかった。そのため、ヒトタンパク質をコードする16,152の遺伝子を発現させたタンパク質を搭載したプロテインアレイ解析を行い、12-13.8に特異的に反応する候補タンパク質を同定した。その候補上位１０種類についてタンパク質を哺乳動物細胞で発現させたところ、１種類の候補遺伝子を導入した細胞溶解液のウエスタンブロット解析で12-13.8に特異的に反応した。さらに、同遺伝子を大腸菌で発現させ、ウエスタンブロット解析したところ同様に反応した。同遺伝子産物は細胞表面で糖鎖修飾を多数受けることが知られており、そのため質量解析で同定できなかったことが判明した。
現在、１）同遺伝子産物に対するモノクローナル抗体をさらに作製しており、血液中での遺伝子産物の同定により膵がんをはじめとしたさまざまながんの早期診断および予後診断に応用可能か検討している。今後、２）抗原分子が同定できたことで、膵がん撲滅に向けたバイオ医薬品開発をさらに加速させていく。
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