腫瘍特異的遺伝子異常による肺癌再発予測バイオマーカーの開発と補助化学療法の効果

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K10674
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 橋本 毅久 新潟大学, 医歯学総合病院, 特任教授 (30334668)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 佐藤 征二郎 新潟大学, 医歯学系, 助教 (40646931) ; 土田 正則 新潟大学, 医歯学系, 教授 (60293221) ; 小池 輝元 新潟大学, 医歯学系, 講師 (90635723)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 肺癌 / 遺伝子異常 / 術後再発

Outline of Annual Research Achievements

本研究は対象症例の手術前後の血清から腫瘍由来の微量なDNAの検出すなわちmethylation-specific PCR(MS-PCR)法および変異特異的プローブによるreal-time PCR法などを利用して血清中からメチル化DNAや変異DNAの検出を試み、再発予後との関係を調べて再発ハイリスク症例を選別することを目的の一つとしている。
28年度は、MS-PCR 法の検出感度・特異性に関して検討した。まずメチル化DNAの希釈系列を作成した後、DNAをSodium bisulfite処理し、DNAのチミンをウラシルに変換した。p16遺伝子のプロモーター領域のメチル化を特異的に検出できるプライマーを設計してPCRをおこない検出感度と特異性を調べた。特異性と感度を高めるためにnested PCRとし、2nd PCRではアニーリング温度を高く(72℃)設定した。更に各サイクル時間を短くし(15秒)且つサイクル数を多くした(35サイクル)。その結果メチル化DNAを10の-6乗まで希釈したサンプルでもp16遺伝子のプロモーター領域のメチル化を検出することが可能となった。本研究では完全切除された非小細胞肺癌の原発巣の遺伝子変異、融合遺伝子、プロモーター領域のメチル化の有無を調べ、異常の認められた症例を研究の対象症例としている。現在、原発巣でのp16遺伝子のプロモーター領域のメチル化の有無やEGFR遺伝子変異の有無を検索中である。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

保存サンプルの整理分別とDNAの抽出に時間を要することや、主な勤務地、研究施設とが遠隔にあり円滑に研究が行い難く、当初予定していたエフォートが得られないため。

Strategy for Future Research Activity

臨床腫瘍・血液サンプルの保存、臨床データ管理、DNAの抽出：以前の研究から腫瘍組織や血清の保存はなされているが、更に解析症例を増やすために症例の蓄積を続ける。凍結保存されている患者の術前及び術後の血清からDNAを抽出し、DNA量を検証。MS-PCR法およびreal-time PCR法を用いて術前・術後血清から遺伝子異常の検出が可能であるかを調べる。再発予後との関係を調べる。

Causes of Carryover

昨年度は研究の遅れもあり、既存の設備や試薬を用いることによって遂行可能であったため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

研究の進行に応じて備品、試薬購入の必要性が生じる予定である。