2016 Fiscal Year Research-status Report
毛様細胞性星細胞腫における増殖血管内皮の起源の解明
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16K10763
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| Research Institution | University of Miyazaki |
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Principal Investigator |
竹島 秀雄 宮崎大学, 医学部, 教授 (70244134)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
横上 聖貴 宮崎大学, 医学部, 講師 (40284856)
山下 真治 宮崎大学, 医学部, 助教 (40468046)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | microvascular / proliferation / Pilocytic astrocytoma |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々の研究室では、これまでに膠芽腫の新生血管(microvascular proliferation: MVP)の形成において腫瘍細胞自体がmesenchymal transitionによって関与するメカニズムがあることをP53を腫瘍細胞のマーカーとして、免疫組織化学的手法にLaser microdissection, DNA sequenceを組み合わせて報告した(Kawasoe et al., J Neurosurg, 2015)。今回この手法を応用して、良性に分類されるものの，形態的には同様の新生血管が出現する毛様細胞性星細胞腫において腫瘍細胞の関与があるか否かを解明するのが，本研究の目的である。
毛様細胞性星細胞腫では、遺伝子異常がKIAA-BRAFの遺伝子増幅に伴う融合遺伝子が70%の症例で見られるとされる。現在、腫瘍サンプル６例のうち、１）cDNAを合成し、PCRで50%の症例で融合遺伝子を検出した。２）この症例で、genomic DNAからLA-PCRの手法でイントロンを含んだ長い融合遺伝子そのものを増幅し、DNAシークエンスでそのDNA断片がbreakpointを含んだfusion geneである事が確認できた。本年度は、毛様細胞性星細胞腫に存在するMVPをLaser microdissectionでサンプリングし、LA-PCRの系を用いて腫瘍細胞の関与を確認していく予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今年度はこの研究の核となる、KIAA1549-BRAF fusion遺伝子そのものの検出法の確立が達成できた。すなわち、従来のcDNAのDNAシークエンス解析で融合遺伝子が検出された３症例において、genomic DNAを抽出し、LA-PCR法で7kB長のイントロンを含む融合遺伝子本体を増幅し、これをDNAシークエンス解析で確定した。本年度は、その条件設定に多少 時間を要した。
次のステップとして、パラフィン包埋切片からLaser microdissection法により毛様細胞性星細胞腫の新生血管(microvascular proliferation: MVP)を切り出しており、微量のDNAからLA-PCRでの検出を行っている。
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| Strategy for Future Research Activity |
LMDで得られた微量サンプルのDNAからLA-PCRにて増幅した融合遺伝子の検出法として、次世代シークエンサーの活用を考えていたが、増幅する遺伝子自体が長いため、十分な効率を得られない可能性が高く、より確実な方法に検出方法を変更する。
すなわち、サザンブロットにてより特異的に検出することで、微量サンプルの欠点を補いたいと思っている。
また、これに加えて、比較としての膠芽腫のMVPの解析を同時に行っていく方針である。より変異を検出する頻度の高いTERT mutationを腫瘍細胞のマーカーとして、各組織における変異の定量化を目指して、PCR産物をサブクローン化してDNAシークエンス解析にて定量化方法を確立する。
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Research Products
(1 results)
