2017 Fiscal Year Research-status Report
骨芽細胞による石灰化を制御する新規血清タンパク質の同定
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16K10915
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| Research Institution | Niimi College |
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Principal Investigator |
佐々木 順造 新見公立大学, 健康科学部, 教授(移行) (30093686)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤田 洋史 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (20423288)
岡 剛史 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 特任講師 (50160651)
瀧川 朋亨 岡山大学, 大学病院, 助教 (80613166)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 石灰化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
In vitroにおける骨芽細胞分化培養の際に死細胞が出現し、その細胞が石灰化のコアとなっていることが明らかとなっている。そしてこの石灰化には血清タンパク質の関与が示唆されている。本研究課題では、骨芽細胞による石灰化を制御する血清タンパク質を同定することを目的としている。前年度までの研究では、質量分析により死細胞に結合する分子の同定を行い、石灰化制御候補分子とした。今年度の研究では、複数の候補分子の遺伝子クローニングを行った。骨芽細胞の前駆細胞である骨髄間葉系幹細胞株に候補分子の遺伝子を発現させるため、それぞれの遺伝子をMammalian FLAG Expression vector pFLAG-CMV5.1にクローニングした。また、骨髄間葉系幹細胞株へのトランスフェクションは導入効率が低いため、エレクトロポレーションによる導入の検討を行なった。加えて、in vivoでの石灰化にこれら分子が関与することを可視化するため、GFPノックインマウスを作製する実験系の構築を試みた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
死細胞に関連した石灰化候補分子の発現ベクターを複数構築するところまで遂行できた。また、同定分子の局在解明に有用なノックイン技術を推進することができ、おおむね順調であると判断した。
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| Strategy for Future Research Activity |
構築した発現ベクターを用いて、骨髄間葉系幹細胞の骨芽細胞分化の際の石灰化に、候補分子がどのような影響を与えるか明らかにする。そのために、まず強制発現の確認をFLAG抗体を用いたウエスタンブロットにより、発現していることを確認する。その後、石灰化への影響を明らかにするため、候補分子強制発現細胞を骨芽細胞に分化誘導し、その際に生じる石灰化量を定量化する。また、石灰化領域と候補分子の共局在をImmunocytochemistryと共焦点顕微鏡により解析する。得られた研究成果は論文として専門誌に投稿し、学会発表にて公表する予定である。
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| Causes of Carryover |
当初予定していた候補分子のリコンビナントタンパク質の合成の前に、過剰発現による石灰化の解析を行なっているため、次年度への持ち越しが生じた。過剰発現による石灰化の解析結果から、有力な候補分子を同定後、リコンビナントタンパク質の合成を行うことを計画しており、この経費として使用する予定である。
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[Presentation] 植物性エストロゲンはガン診断マーカープロトポルフィリンIXの排出を抑制する2017
Author(s)
藤田 洋史, 永川 恵介, 小渕 浩嗣, 荻野 哲也, 近藤 洋一, 井上 啓史, 執印 太郎, 内海 俊彦, 内海 耕慥, 佐々木 順造, 大内 淑代
Organizer
第114回岡山医学会総会
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