2018 Fiscal Year Annual Research Report

The analysis of roles of NLRP7 in molar pregnancies using NLRP7-deleted HTR-8/SVneo cells.

Research Project

Project/Area Number	16K11120
Research Institution	Kio University
Principal Investigator	前原佳代子畿央大学, 健康科学部, 教授 (80421311)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	祐實泰子畿央大学, 健康科学部, 講師 (80425454)
Project Period (FY)	2016-04-01 – 2019-03-31
Keywords	反復胞状奇胎 / NLRP7遺伝子 / ゲノム編集
Outline of Annual Research Achievements	産婦人科領域の絨毛性疾患である胞状奇胎の多くは、雄核発生（ゲノム欠損卵子に1精子受精あるいは2精子受精）や正常卵子に2精子受精が原因で発症すると考えられている。一方、父母に由来するゲノムを１セットずつ継承しているにもかかわらず、母親の染色体19番にコードされているNLRP7 (NLR family, pyrin domain containing 7) 遺伝子に変異があると繰り返して胞状奇胎（反復胞状奇胎）を発症することが我々のグループを含めて複数のグループから報告されている。NLRP7遺伝子変異がどのように胞状奇胎の病態を形成するか、そのメカニズムは不明である。本研究の目的は、ゲノム編集CRISPER/Casシステムを利用しNLRP7遺伝子を破壊した反復胞状奇胎の疾患モデルヒト細胞を作成し、NLRP7遺伝子の機能の一端を明らかにすることである。 trophoblast cell lineの HTR-8/SVneoを利用して、CRISPR/Casによるダブルニッキング法でゲノムの改変を行った。複数のクローンからゲノムDNAを抽出し、サンガー法でゲノムDNAの塩基配列を調べた結果、ゲノムDNAの改変のパターンから遺伝子破壊ができていると思われる細胞株が2つ得られた。2つの細胞株におけるNLRP7タンパク質のレベルをウエスタンブロッティングで調べた。市販の抗体2つのうち1つの抗体は非特異的なバンドを複数認め、NLRP7タンパク質の検証ができなかった。もう1つの抗体で、コントロールの細胞に比べてタンパク質の減少が確認された。今後は、胞状奇胎に特徴的な形態変化の有無、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（hCG）の産生増加などを調べる。胞状奇胎の特徴を備えていることが検証できたら、NLRP7遺伝子破壊のよる表現型の解析を行う。