子宮平滑筋肉腫の治療標的であるAnnexin A4の機能解析

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K11137
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 藤田 征巳 大阪大学, 医学系研究科, 招へい准教授 (60303963)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 松崎 慎哉 大阪大学, 医学部附属病院, 助教 (00467565) ; 上田 豊 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (10346215) ; 高田 友美 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (30437420) [Withdrawn] ; 小林 栄仁 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (50614773) ; 吉野 潔 大阪大学, 医学系研究科, 准教授 (90362730)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: Annexin A4 / プラチナトランスポーター / 子宮平滑筋肉腫 / 抗癌剤耐性 / 中和抗体

Outline of Annual Research Achievements

①子宮平滑筋肉腫におけるAnnexin A4 の発現の検討
我々は婦人科癌でキードラッグであるプラチナ製剤が、子宮平滑筋肉腫において有効でないのは子宮平滑筋肉腫においてAnnexin A4 (以下、Anx A4)が発現しているからと仮定している。Anx A4は、子宮平滑筋肉腫細胞株 3株のうち、2株において発現を認めた。臨床検体における評価では20例の検体のうち、12例(66.7%)と発現を認めていることが確認できた。
②Anx A4の発現の子宮平滑筋肉腫における役割の検討
Anx A4を発現する子宮平滑筋肉腫細胞株 SK-LMS細胞株において、Anx A4の発現をsiRNAを用いて抑制したところ、シスプラチンの50%阻害濃度が 17μMから6μMと有意にプラチナ耐性が改善した(p<0.05)。これらのことから、子宮平滑筋肉腫において発現するAnx A4が、プラチナ耐性獲得のメカニズムにおいて重要であることが示唆された。
③Anx A4の発現を抑制した株と親株との間のシスプラチン暴露後の細胞内プラチナ蓄積量の比較
SK-LMS細胞株10万細胞とsiRNAを用いAnx A4の発現を抑制した状態のSK-LMS細胞株10万細胞に対して、シスプラチン50μMに24時間暴露後細胞を回収した。その回収した細胞をICP-MS法を用いた細胞内総プラチナ蓄積量の解析を行ったところ、無処理の細胞株が11.2ngであったのに対し、Anx A4の発現を抑制した状態のSK-LMS細胞株は30.6ngとプラチナ蓄積量の有意な増加を認めた。これはAnx A4の発現抑制により、細胞内のプラチナ排出が低下したためだと考えられた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

28年度計画はほぼ終了している。細胞接着・細胞間相互作用・細胞移動について評価を行っていないのは、Anx A4の発現抑制が効果的にプラチナ耐性改善を示しており、こちらの機序解明を優先させるべきと考えられたためである。

Strategy for Future Research Activity

Anx A4のプラチナ耐性に関わるメカニズムの解析
（１）SK-LMS細胞株に対してAnx A4 shRNAを遺伝子導入し、恒常的に発現を抑制した細胞株 (SK-LMS-A4株）の作成（２）SK-LMS-A4株のプラチナ耐性の変化（３）SK-LMS-A4株とSK-LMS親株のシスプラチン暴露後のプラチナ定量（４）Anx A4とプラチナ耐性に関わるプラチナトランスポーターの解析（５）SK-LMS-A4株とSK-LMS親株を用い、Xenograftモデルを作成

Anx A4の発現抑制による子宮平滑筋肉腫のプラチナ耐性の改善は既に証明できたが、その機序が十分に評価できなかったため、機序解明を進める予定である。また、SK-LMS細胞株とSK-LMS-A4株を用いたXenograftモデルを作成し、in vivoにおけるシスプラチンの感受性試験を行う予定である。

Causes of Carryover

Western Blotting法によるAnx A4の評価、siRNAを用いたAnx A4 の発現を抑制した実験、細胞内プラチナ定量など今年度は十分量の実験を行うことができたが、これらの実験に時間を要したため、物品の購入が滞った。マウスモデルやAnx A4のshRNAを遺伝子導入した細胞株の作成のために、残額は次年度以降、繰り越しとした。
来年度以降は、shRNAを用いた恒常的なAnx A4ノックダウン株の作成や、Xenograftモデルの作成、中和抗体の作成に向け、予算が必要である。

Expenditure Plan for Carryover Budget

子宮平滑筋肉腫細胞株におけるAnx A4の発現を減弱・増強させ、プラチナ製剤に対する感受性の変化を観察する研究に必要な各種試薬を購入する予定である。さらにAnx A4に対する中和抗体の作成を計画しており、各種試薬を購入する。またマウスを用いた解析も行う予定であるため、マウスの購入とその管理に資金を要する。

Research Products

• [Journal Article] Struggles within Japan's national HPV vaccination: a proposal for future strategy. (2017)
  • Author(s): Tanaka, Y. Ueda, Y. Kimura, T.
  • Journal Title: Hum Vaccin Immunother Volume: 6 Pages: 1-2
  • DOI: 10.1080/21645515.2016.1267085
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Drug screening and grouping by sensitivity with a panel of primary cultured cancer spheroids derived from endometrial cancer (2016)
  • Author(s): Kiyohara, Y. Yoshino, K. Kubota, S. Okuyama, H. Endo, H. Ueda, Y. Kimura, T. Kamiura, S. Inoue, M.
  • Journal Title: Cancer Sci Volume: 17(4) Pages: 452-60
  • DOI: 10.1111/cas.12898
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Outcomes for girls without HPV vaccination in Japan (2016)
  • Author(s): Tanaka, Y. Ueda, Y. Egawa-Takata, T. Yagi, A. Yoshino, K. Kimura, T.
  • Journal Title: Lancet Oncol Volume: 17(7) Pages: 868-9
  • DOI: 10.1016/S1470-2045(16)00147-9
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Development of an efficient strategy to improve HPV immunization coverage in Japan (2016)
  • Author(s): Yagi, A. Ueda, Y. Egawa-Takata, T. Tanaka, Y. Morimoto, A. Terai, Y. Ohmichi, M. Ichimura, T. Sumi, T. Murata, H. Okada, H. Nakai, H. Mandai, M. Yoshino, K. Kimura, T. Saito, J. Kudoh, R. Sekine, M. Enomoto, T. Hirai, K. Horikoshi, Y. Takagi, T. Shimura, K.
  • Journal Title: BMC Public Health Volume: 16(1) Pages: 1013
  • DOI: 10.1186/s12889-016-3676-7
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Mothers' attitudes in Japan regarding cervical cancer screening correlates with intention to recommend cervical cancer screening for daughters (2016)
  • Author(s): Egawa-Takata, T. Ueda, Y. Tanaka, Y. Morimoto, A. Kubota, S. Yagi, A. Terai, Y. Ohmichi, M. Ichimura, T. Sumi, T. Murata, H. Okada, H. Nakai, H. Mandai, M. Yoshino, K. Kimura, T. Saito, J. Kudo, R. Sekine, M. Enomoto, T. Horikoshi, Y. Takagi, T. Shimura, K.
  • Journal Title: Int J Clin Oncol Volume: 21(5) Pages: 962-968
  • DOI: 10.1007/s10147-016-0970-4
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Japanese Crisis of HPV Vaccination (2016)
  • Author(s): Sekine, M. Kudo, R. Adachi, S. Yamaguchi, M. Ueda, Y. Takata, T. Morimoto, A. Tanaka, Y. Yagi, A. Miyagi, E. Enomoto, T.
  • Journal Title: Int J Pathol Clin Res Volume: 2(2) Pages: 039
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Presentation] ATP7A is a promising therapeutic target for uterine leiomyosarcoma (2016)
  • Author(s): Kakuda, M. Matsuzaki, S. Tanaka, Y. Takata, T. Kobayashi, E. Ueda, Y. Yoshino, K. Kimura, T.
  • Organizer: 第75回日本癌学会学術集会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2016-10-06 – 2016-10-08
• [Presentation] Disparities in the incidence of HPV 16/18 infections among young females depending on an unfortunate year of birth (2016)
  • Author(s): Tanaka, Y. Ueda, Y. Yagi, A. Takata, T. Matsuzaki, S. Yoshino, K. Satoh, M. Miyagi, E. Enomoto, T. Nakayama, T. Morii, E. Kimura, T.
  • Organizer: 第75回日本癌学会学術集会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2016-10-06 – 2016-10-08
• [Presentation] Lipolysis-stimulated lipoprotein receptor（LSR）can be a new therapeutic target for ovarian cancer. (2016)
  • Author(s): Satoko, M. Hiramatsu, K. Serata, S. Nakagawa, S. Shinya, M. Fujimoto, Y. Ueda, Y. Yoshino, K. Enomoto, T. Kimura, T. Naka, T.
  • Organizer: 第75回日本癌学会学術集会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2016-10-06 – 2016-10-08
• [Presentation] 抗 Lipolysis-stimulated lipoprotein receptor（LSR）抗体は卵巣癌の新規治療法になりうる (2016)
  • Author(s): 崎聖子 平松 宏祐 世良田聡 中川慧 松崎慎哉 小林栄仁 上田豊 吉野潔 木村正 仲哲治
  • Organizer: 第56回日本産科婦人科内視鏡学会学術講演会
  • Place of Presentation: 長崎
  • Year and Date: 2016-09-01 – 2016-09-03
• [Presentation] ATP7A は子宮平滑筋肉腫の治療標的である (2016)
  • Author(s): 角田守 松崎慎哉 田中佑典 森本晶子 高田友美 小林栄仁 上田豊 吉野潔 木村正
  • Organizer: 第15回日本婦人科がん分子標的研究会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 2016-08-19 – 2016-08-20
• [Presentation] 抗 Lipolysis-stimulated lipoprotein receptor（LSR）抗体は卵巣癌の新規治療法になりうる (2016)
  • Author(s): 松崎聖子 平松 宏祐 世良田聡 中川慧 松崎慎哉 小林栄仁 上田豊 吉野潔 木村正 仲哲治
  • Organizer: 15回日本婦人科がん分子標的研究会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 2016-08-19 – 2016-08-20
• [Presentation] AdSOCS-1はPD-L1を抑制して抗腫瘍免疫を増強し卵巣癌に対する強力な抗腫瘍免疫効果を発揮する (2016)
  • Author(s): 中川慧 世良田聡 松崎慎哉 高田友美 小林栄仁 上田豊 吉野潔 仲哲治 木村正
  • Organizer: 第58回日本婦人科腫瘍学会学術講演会
  • Place of Presentation: 鳥取
  • Year and Date: 2016-07-08 – 2016-07-10
• [Presentation] ATP7Bは子宮平滑筋肉腫の治療標的である (2016)
  • Author(s): 角田守 松崎慎哉 田中佑典 高田友美 小林栄仁 上田豊 吉野潔 木村正
  • Organizer: 第58回日本婦人科腫瘍学会学術講演会
  • Place of Presentation: 鳥取
  • Year and Date: 2016-07-08 – 2016-07-10
• [Presentation] 抗Lipolysis-stimulated lipoprotein receptor(LSR)抗体は卵巣癌の治療法になりうる (2016)
  • Author(s): 松崎聖子 平松宏祐 世良田聡 中川慧 松崎慎哉 高田友美 小林栄仁 上田豊 吉野潔 木村正 仲哲治
  • Organizer: 第58回日本婦人科腫瘍学会学術講演会
  • Place of Presentation: 鳥取
  • Year and Date: 2016-07-08 – 2016-07-10
• [Presentation] Anti-LSR monoclonal antibody inhibits ovarian cancer growth via inhibition of lipid metabolism (2016)
  • Author(s): Hiramatsu, K. Yoshino, K. Enomoto, T. Nakagawa, S. Morimoto, A. Yokoyama, T. Amemiya, K. Matsuzaki, S. Kobayashi, E. Ueda, Y. Naka, T. Kimura, T.
  • Organizer: 第68回日本産科婦人科学学会学術講演会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2016-04-21 – 2016-04-24
• [Presentation] SOCS-1 enhances T call-mediated anti-tumor immunity by negative regulation of PD-L1 and inhibits cancer proliferation (2016)
  • Author(s): Nakagawa, S. Yoshino, K. Matsuzaki. S. Mastuzaki, S. Takata, T. Kobayashi, E. Ueda, Y. Naka, T. Kimura, T.
  • Organizer: 第68回日本産科婦人科学学会学術講演会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2016-04-21 – 2016-04-24
• [Presentation] ATP7A is a promising therapeutic target for uterine leiomyosarcoma (2016)
  • Author(s): Kakuda, M. Matsuzaki, S. Tanaka, Y. Takata, T. Kobayashi, E. Ueda, Y. Yoshino, K. Kimura, T.
  • Organizer: 第68回日本産科婦人科学学会学術講演会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2016-04-21 – 2016-04-24
• [Presentation] “Smartscopy” as a new device to identify the precancerous diseases of the uterine cervix : a pilot study (2016)
  • Author(s): Tanaka, Y. Ueda, Y. Kakuda, M. Kubota, S. Matsuzaki, S. Nakagawa, S. Takata, T. Matsuzaki, S. Kobayashi, E. Yoshino, K. Kimura, T.
  • Organizer: 第68回日本産科婦人科学学会学術講演会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2016-04-21 – 2016-04-24
• [Presentation] SOCS-1 inhibits tumor growth by enhancing T cell mediated antitumor immunity related to PD-L1 (2016)
  • Author(s): Nakagawa, S. Serada, S. Satoko, M. Ueda, Y. Yoshino, K. Fujimoto, M. Kimura, T. Naka, T.
  • Organizer: The 107th Annual Meeting of the American Association for Cancer Research
  • Place of Presentation: New Orleans, U.S.A.
  • Year and Date: 2016-04-16 – 2016-04-20
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] ATP7B is a promising therapeutic target for uterine leiomyosarcoma (2016)
  • Author(s): Kakuda, M. Matsuzaki, S. Tanaka, Y. Takata, T. Kobayashi, E. Ueda, Y. Kimura, T.
  • Organizer: The 107th Annual Meeting of the American Association for Cancer Research
  • Place of Presentation: New Orleans, U.S.A.
  • Year and Date: 2016-04-16 – 2016-04-20
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Dynamic change of differentiation in spheroids derived from mixed small cell carcinoma/adenocarcinoma of the uterine cervix (2016)
  • Author(s): Kubota, S. Nakajima, A. Kiyohara, Y. Endo, H. Okuyama, H. Yoshino, K. Kimura, T. Inoue, M.
  • Organizer: The 107th Annual Meeting of the American Association for Cancer Research
  • Place of Presentation: New Orleans, U.S.A.
  • Year and Date: 2016-04-16 – 2016-04-20
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Lipolysis-stimulated lipoprotein receptor (LSR) can be a new therapeutic target of ovarian cancer. (2016)
  • Author(s): Satoko, M. Hiramatsu, K. Serada, S. Nakagawa, S. Shinya, M. Ueda, Y. Fujimoto, M. Yoshino, K. Kimura, T. Naka, T.
  • Organizer: The 107th Annual Meeting of the American Association for Cancer Research
  • Place of Presentation: New Orleans, U.S.A.
  • Year and Date: 2016-04-16 – 2016-04-20
  • Int'l Joint Research
• [Book] Handbook of Gynecology (2017)
  • Author(s): Shindo, M. Ueda, Y. Kimura, T. Matsuo, K.
  • Total Pages: 18
  • Publisher: Spring Nature
• [Book] Frontiers in Drug Design & Discovery vol. 7 (2016)
  • Author(s): Otake, A. Matsuzaki, S. Ueda, Y. Yoshino, K.
  • Total Pages: 13
  • Publisher: Bentham Science