2017 Fiscal Year Research-status Report
エクソーム解析による眼内悪性リンパ腫の原因遺伝子同定
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16K11281
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
田中 理恵 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (70746388)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
蕪城 俊克 東京大学, 医学部附属病院, 准教授 (00280941)
田岡 和城 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (30529178)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 眼内悪性リンパ腫 / 遺伝子変異 / エクソーム解析 / 網羅的遺伝子解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
2016年8月から2018年3月30日までに眼内悪性リンパ腫が疑われた患者38例43眼に対して硝子体手術を施行し、①細胞診、②IL10/IL6濃度比、③免疫グロブリンH鎖（IgH）遺伝子再構成、④フローサイトメトリー（CD3:CD19比、κ:λ比）の検査を行った。その結果、21例25サンプルについて眼内悪性リンパ腫と診断した。また他施設との共同研究により4例7サンプルの提供を頂き、25例32サンプルが解析可能な状態となった。
当初、硝子体サンプルからDNAを回収し、網羅的な遺伝子変異の解析（エクソーム解析）を行う予定であったが、DNA量が不足するためMDA法を用いてDNAの増幅を行った。しかし多くのサンプルでDNA増幅は不良であり、DNA増幅によるエクソーム解析は断念した。一方、我々は続発性眼内悪性リンパ腫の原発巣あるいは全身への再発巣の病理組織を解析し、30例中29例（97%）でリンパ腫の組織型が予後不良なactivated B cell type (ABC type)のびまん性大細胞型リンパ腫（DLBCL）であることを見いだした（Karakawa A, et al. Br J Haematol. 2017）。眼内リンパ腫もABC typeの可能性が高いと考えられる。ABC typeのDLBCLに関しては、脳および他臓器においてMyD88におけるc.794T>CやPIM1におけるc.550C>Tなどの遺伝子変異が高率にみられることが報告されている。これら脳および他臓器で既知の遺伝子変異が眼内悪性リンパ腫細胞でもみられるかを、デジタルPCRを用いて解析することにした。デジタルPCRでは必要なDNA量が少なくDNA増幅の必要が無い、サンプル中で0.1%程度の頻度の低い遺伝子変異でも検出できる、などの利点があり、サンプル量の少ない眼内悪性リンパ腫の遺伝子変異解析に適していると考える。現在、デジタルPCRのためにプローブの作成を行っている。
研究はやや遅れていると考える。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
DNA量が不足するためMDA法を用いてDNAの増幅を行ったが、多くのサンプルでDNA増幅は不良であり、DNA増幅によるエクソーム解析は断念した。そこで、脳および他臓器で既知の遺伝子変異が眼内悪性リンパ腫細胞でもみられるかを、デジタルPCRを用いて解析することにした。このため、進捗状況はやや遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度も眼内悪性リンパ腫患者からの硝子体液の収集を継続し、目標サンプル数の40サンプルの達成を目指す。また、次年度はデジタルPCRを用いて脳や他臓器のDLBCLで知られているMyd88, PIM1, CD79B、BTG2における特異的な遺伝子変異が、眼内悪性リンパ腫でもみられるかについて検討を行う予定である。デジタルPCRは解析に必要なDNA量が少なく、DNA増幅の必要が無い。また、サンプル中で0.1%程度しかない頻度の低い遺伝子変異でも検出できる、などの利点がある。このことから、デジタルPCRはサンプル量の少なく、炎症細胞（正常細胞）と悪性細胞（悪性リンパ腫細胞）が混在する病態となりやすい眼内悪性リンパ腫の遺伝子変異の解析には非常に適していると考える。現在、デジタルPCRのためにプローブの作成を行っている。本研究により眼内悪性リンパ腫細胞で頻度の高い遺伝子変異がみつかれば、眼内悪性リンパ腫の診断に役立つマーカーとなる可能性がある。
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