2017 Fiscal Year Research-status Report

線維柱帯細胞の貪食作用に対する生理活性物質の影響とその調節機構の解明

Research Project

Project/Area Number	16K11289
Research Institution	Kumamoto University
Principal Investigator	藤本智和熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 助教 (50756426)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	谷原秀信熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 教授 (60217148) 井上俊洋熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (00317025)
Project Period (FY)	2016-04-01 – 2019-03-31
Keywords	線維柱帯細胞 / 貪食能 / Rho / ROCK
Outline of Annual Research Achievements	眼圧は房水の産生と流出により調節されているが、その均衡が破綻し房水流出抵抗が増加すると眼圧が上昇し、緑内障の発症および進行のリスクとなる。房水流出の主経路を構成する線維柱帯細胞は貪食作用を有し、線維柱帯組織の異物を除去し、正常な房水流出の維持に寄与している。緑内障眼では細胞外基質の異常な蓄積による房水流出抵抗の増加が認められており、線維柱帯細胞の貪食能の低下もその一因と考えられている。本研究ではアクチン骨格に影響を与えるROCK阻害剤やN-WASP阻害剤、緑内障との関連が報告されている各種サイトカインの線維柱帯細胞の貪食作用への影響について検討を行い、その貪食作用を調節する分子機構を明らかにすることで、線維柱帯際細胞の貪食作用が関与する房水流出調節機構の解明を目指す。本年度はRho-ROCKシグナルの線維柱帯細胞の貪食作用に対する作用を中心に検討を行った。リゾフォスファチジン酸（LPA）およびcalpeptinは種々の細胞でRhoAを活性化させることが報告されている。我々の検討でもLPAおよびcalpeptin刺激30分および1時間後で有意にRhoAが活性化されることを確認した。LPAおよびcalpeptin添加1時間後の線維柱帯細胞に蛍光標識されたbioparticleを貪食させたところ、刺激なしの細胞と比べ有意な貪食能の低下が確認された。Rho阻害剤をLPAおよびcalpeptinとともに添加すると、LPAおよびcalpeptinの貪食能低下は有意に抑制された。さらにsiRNAを用いたRhoAのノックダウンを行った線維柱帯細胞をLPA刺激すると、LPAによる貪食能低下は認められなかった。これらの結果から、RhoAの活性化が線維柱帯細胞の貪食能を低下させることが明らかとなった。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason セルソーターを使用した評価系への変更により、データの精度および取得効率が改善できた。そのため線維柱帯細胞におけるRho-ROCKシグナルと貪食能との関係について順調にデータを収集することができ、このデータを使用し学会発表することもできた。
Strategy for Future Research Activity	RhoAの活性化が貪食能の低下につながることは確認できたので、その下流であるROCKやｍDiaへの影響について検討を進める。また、他のサイトカインについても当初の研究計画に従い検討を進める。