2017 Fiscal Year Research-status Report
小児固形悪性腫瘍に対する、免疫学的糖鎖解析法を用いた新規診断システム法の開発
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16K11347
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
木下 義晶 九州大学, 大学病院, 准教授 (80345529)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田口 智章 九州大学, 医学研究院, 教授 (20197247)
宗崎 良太 九州大学, 医学研究院, 講師 (10403990)
三好 きな 九州大学, 医学研究院, 助教 (20621709)
久田 正昭 琉球大学, 医学部附属病院, 医員 (40381230)
瀬戸山 大樹 九州大学, 大学病院, 助教 (30550850)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 小児固形悪性腫瘍 / 免疫学的糖鎖解析法 / AFP / 診断システム |
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| Outline of Annual Research Achievements |
代表的腫瘍マーカーであるAFP（Alpha－feto protein）には3つの分画(L1,L2,L3)があり、成人の肝細胞癌ではL3分画が特異的に高値を示す。採血検体からL3分画を簡易的に測定できるシステムが1990年代後半に確立されたが、この診断システムは分析方法の限界によりL2とL3分画を分離して測定できないため、測定値にはL2値を含む。小児期においては生理的にL2分画が新生児期～幼児期には高いこと、小児固形悪性腫瘍としてはL2分画が高いとされる卵黄嚢癌、L3分画が高いとされる肝芽腫があることなどより、このシステムではL3分画が高値と測定されても生理的高値なのか、卵黄嚢腫瘍成分を反映しているのか、肝腫瘍成分を反映しているのか区別できない。本研究では免疫学的手法、質量分析法などを用いてL2分画をL3より分離して測定することを可能にし、非侵襲的新規簡易診断システムの開発を行うことを目的とする。
研究材料として九州大学小児外科で経験した小児固形悪性腫瘍患者150例 (被験者群) 、および当科診療中の良性疾患患者・術後経過観察中の児100例 (対照群) の血清検体、組織検体を対象とする。平成29年度はCon Aレクチンを用いた免疫電気泳動法によるL2分画の分離、定量化により得られたデータより新生児期・乳児期における生理的L2分画の基準値設定を行った。さらに糖鎖抗原に対するモノクローナル抗体の作製とECLIA法によるL2分画測定ならびに、病理組織学的解析を継続して行っている。平成30年度以降は質量分析法による精製糖鎖%L2の測定を行い、データの整合性が得られれば機器システムの製作へ進める予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
平成29年度は28年度に行っている以下の2点につき研究を継続した。
1)Con Aレクチンを用いた免疫電気泳動法によるL2分画の分離、定量化新生児期・乳児期における生理的L2分画の基準値設定
2)糖鎖抗原に対するモノクローナル抗体の作製とECLIA法によるL2分画測定
1)レンズ豆レクチンゲルにおける電気泳動では、L2分画とL3分画を完全に分離できない。しかし、ジャック豆レクチン (Concanavalin A: Con A) を用いると、L2分画とL1分画・L3分画を分離できることが知られている (Taketa K, Electrophoresis, 1998)。そこで、被験者群ならびに対照群の血清中L2分画を、Con Aを用いたレクチンゲル電気泳動法により分離する。卵黄嚢腫瘍においてはL2を示唆するバンドが認められた。さらに、抗AFP抗体を結合した膜にブロッティングを行った 。現在抗体法で染色したバンドパターンを画像解析ソフト (Bio Image®) で解析・数値化し、腫瘍例と非腫瘍例および腫瘍別に比較検討している。
2)新生児期・乳児期における生理的L2分画の基準値設定
対照群のうち、生後12か月未満の新生児・乳児症例について、Con Aを用いたレクチンゲル電気泳動でL2分画値を求め、採血時日齢とL2分画の割合をプロットし、推移曲線を描出し、乳児期のL2分画基準値を設定する解析を行った。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度以降以下の研究内容を予定している。
質量分析法による精製糖鎖%L2の測定
糖鎖解析に最適化したFT-MS定性分析、LC-MS MRMモードによるAFP-L2分画定量法の確立
MassSpectorpmetryを用いた質量分析法(LC-MS法,GC-MS法,FT-MS法,MALDI-MS法)に基づいた細胞内低分子代謝物の定性・定量分析技術を、糖鎖分析に応用し、L2分画質量分析を行う。
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| Causes of Carryover |
乳児期のL2分画基準値を設定する解析を次年度も継続して行うため。加えて、質量分析法による精製糖鎖%L2の測定に使用する。
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