唾液腺癌幹細胞における転写因子NR４A２を介した抗癌剤抵抗性のメカニズムの解析

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K11684
• Research Institution: Hiroshima University
• Principal Investigator: 石岡 康希 広島大学, 病院(歯), 歯科診療医 (70770840)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小野 重弘 広島大学, 医歯薬保健学研究科(歯), 助教 (70379882) ; 重石 英生 広島大学, 医歯薬保健学研究科(歯), 講師 (90397943)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 唾液腺癌 / 癌幹細胞 / NR4A2

Outline of Annual Research Achievements

(1)唾液腺癌幹細胞におけるアポトーシス抵抗性の検討
唾液腺癌細胞を用いて、FACS解析によりCD44high/ESAlow 細胞、CD44high/ESAhigh細胞、CD44low 細胞をそれぞれsortingした。CD44high/ESAlow細胞、CD44high/ESAhigh細胞、CD44low細胞において、AnnexinVを用いて、5-FUにより誘導されるアポトーシス細胞を検出した。その結果、CD44high/ESAlow細胞は最も高いアポトーシス抵抗性を示し、またCD44high/ESAhigh細胞のアポトーシス抵抗性は外因性のPGE2により増加した。
(2)転写因子NR4A2によるアポトーシス抵抗性への影響
CD44high/ESAhigh細胞におけるNR4A2発現を検討したところ、蛍光免疫染色にてNR4A2は核内に発現を認めた。さらに、PGE2添加によってNR4A2のmRNA発現は増加し、PKA inhibitorの添加により、NR4A2 mRNA発現は減少した。以上の結果から、CD44high/ESAhigh細胞のNR4A2の発現にはPGE2が関与していることが示唆された。
(3)CD44high唾液腺癌細胞におけるNR4A2 siRNAノックダウンによるアポトーシス抵抗性の検討
CD44high唾液腺癌細胞では、NR4A2 siRNAノックダウン後、5-FUにより誘導されるアポトーシス細胞の割合は増加した。このことから、NR4A2がCD44high唾液腺癌細胞のアポトーシス抵抗性に関与している可能性が示唆された。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

（理由）癌幹細胞形質を示すCD44high細胞のアポトーシス抵抗性には、転写因子NR4A2が関与している可能性が示唆される。

Strategy for Future Research Activity

（今後の推進方策）
NR4A2過剰発現細胞における癌幹細胞形質の検討を行う。NR4A2を過剰発現させた唾液腺癌細胞を作成し、幹細胞マーカー遺伝子の発現を解析し、スフィアコロニー形成能などの癌幹細胞形質について検討する予定である。

Causes of Carryover

（理由）細胞培養やFACS解析のための研究費用が予定金額を下回ったため。
（使用計画）次年度使用額については、FACS解析のための試薬やNR4A2過剰発現細胞の作成に必要な費用に充てる計画である。