口腔がんに対する再発予防がんペプチドワクチン療法の確立

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K11729
• Research Institution: Sapporo Medical University
• Principal Investigator: 宮崎 晃亘 札幌医科大学, 医学部, 准教授 (10305237)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小林 淳一 札幌医科大学, 医学部, 助教 (80404739) ; 宮本 昇 札幌医科大学, 医学部, 研究員 (80749565) ; 岡本 準也 札幌医科大学, 医学部, 研究員 (10749592)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: がんペプチドワクチン療法 / がん抗原 / 口腔がん / サバイビン / がん免疫療法 / がん幹細胞

Outline of Annual Research Achievements

局所進行・再発口腔がんに対するがんペプチドワクチン療法の臨床試験ならびにがんペプチドワクチン創薬化を目指した新規がん抗原の分離同定に係る基礎的研究を継続して行った。
臨床試験では、不完全フロイントアジュバント＋インターフェロンαを併用したサバイビン遺伝子産物由来ペプチドの第Ⅰ/II相臨床試験が進行中である。一部の症例では免疫学的効果のみならず腫瘍縮小効果や腫瘍マーカーの低下などの臨床的効果も得られている。現在のところ重篤な有害事象は出現していない。
新規がん抗原の分離同定に係る基礎的研究では、新規に樹立した口腔がん細胞株OTMと自己の末梢血単核細胞から分離したCD8陽性T細胞を共培養してcytotoxic T lymphocyte (CTL) TcOTMを誘導し、autologous tumor-CTL pairを作製した。さらに、limiting dilution法によりTcOTM cloneを作製した。抗原特異的CTL応答をインターフェロンγ ELISpot assayやLDH release cytotoxicity assayで解析した。その結果、TcOTM cloneは自家口腔がん特異的細胞傷害活性を有するのみならず、非自己のHLA-A24陽性口腔がん細胞株OSC-19、HSC-2に対しても高い細胞傷害活性を示したことから、HLA-A24陽性口腔がんに発現している共通抗原を認識していることが示唆された。これらの研究成果は、効率的ながん共通抗原の分離・同定にautologous tumor-CTL pairの作製が有用な手段であることを裏付ける所見であり、今年度はhigh-performance liquid chromatography (HPLC)を用いた直接抽出法によりHLA-A24拘束性ペプチドのスペクトラムを測定し、natural antigenic peptide (NAP)を分離同定する予定である。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

新規口腔がん細胞株OTMの樹立と自家口腔がん特異的細胞傷害活性を有するTcOTM cloneのペアの作製に時間を要したため、後続の研究にやや遅れが生じている。

Strategy for Future Research Activity

サバイビン遺伝子産物由来ペプチドを用いた再発予防ワクチン療法の臨床試験を遂行し、免疫学的効果と再発・転移予防効果ならびに有害事象を評価する。
OTM細胞からlysateを作製し、直接抽出法を用いてOTM細胞表面に発現している抗原ペプチドを抽出する。得られた抽出物をHPLCにより精製し、各フラクションについてTcOTMの反応性を検討し、NAPを同定する。同時にTcOTMの供給には限りがあるため、そのTCRの遺伝子情報を取り出し白血病細胞由来細胞株などの無限増殖が可能な細胞に組み込むことにより検証を継続することを可能にする試みも行う予定である。

Causes of Carryover

新規口腔がん細胞株OTMの樹立と自家口腔がん特異的細胞傷害活性を有するTcOTM cloneのペアの作製に時間を要し、HLA class Ⅰ分子に結合する抗原ペプチドの分離同定など後続の研究にやや遅れが生じているため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

当該年度でやや遅れが生じていたHPLCを用いた抗原ペプチドの同定とサバイビン臨床試験に係る医薬品、生化学的試薬、抗体・関連キットや細胞培養一般試薬等の消耗品費に充当する。

Research Products

• [Journal Article] eby reduce CD8+ T-cell recognition of stressed cells (2016)
  • Author(s): Sasaki T, Kanaseki T, Shionoya Y, Tokita S, Miyamoto S, Saka E, Kochin V, Takasawa A, Hirohashi Y, Tamura Y, Miyazaki A, Torigoe T, Hiratsuka H, Sato N
  • Journal Title: Eur J Immunol Volume: 46 Pages: 929-940
  • DOI: 10.1002/eji.201545835
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Hypoxia-induced epithelial-mesenchymal transition is regulated by phosphorylation of GSK3-β via PI3 K/Akt signaling in oral squamous cell carcinoma (2016)
  • Author(s): Kaneko T, Dehari H, Sasaki T, Igarashi T, Ogi K, Okamoto JY, Kawata M, Kobayashi JI, Miyazaki A, Nakamori K, Hiratsuka H
  • Journal Title: Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Volume: 122 Pages: 719-730
  • DOI: 10.1016/j.oooo.2016.06.008
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 口腔がんに対する新たなペプチドワクチン療法に向けての基礎的研究 (2017)
  • Author(s): 岡本準也, 宮崎晃亘，小林淳一，宮本 昇，中井裕美, 土橋 恵, 中垣貴文, 荻 和弘, 平塚博義
  • Organizer: 第35回 日本口腔腫瘍学会総会・学術大会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡県・福岡市）
  • Year and Date: 2017-01-26 – 2017-01-27
• [Presentation] 75歳以上の高齢口腔扁平上皮癌患者の臨床的検討 (2017)
  • Author(s): 中井裕美, 宮崎晃亘，小林淳一，岡本準也, 土橋 恵, 中垣貴文, 宮本 昇, 荻 和弘, 出張裕也, 佐々木敬則, 平塚博義
  • Organizer: 第35回 日本口腔腫瘍学会総会・学術大会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡県・福岡市）
  • Year and Date: 2017-01-26 – 2017-01-27
• [Presentation] 当科における頭頸部癌に対するセツキシマブの使用経験 (2017)
  • Author(s): 小林淳一，宮崎晃亘，土橋 恵, 中井裕美, 荻 和弘, 佐々木敬則, 岡本準也, 中垣貴文, 宮本 昇, 平塚博義
  • Organizer: 第35回 日本口腔腫瘍学会総会・学術大会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡県・福岡市）
  • Year and Date: 2017-01-26 – 2017-01-27
• [Presentation] The ASB4 natural peptide for CTL immunotherapy targeting cancer stem cells (2016)
  • Author(s): Miyamoto S, Kanaseki T, Takahashi A, Kochin V, Hongo A, Hirohashi Y, Sato N, Torigoe T
  • Organizer: 第45回 日本免疫学会学術集会
  • Place of Presentation: 沖縄コンベンションセンター, ラグナガーデンホテル（沖縄県・宜野湾市）
  • Year and Date: 2016-12-05 – 2016-12-07
• [Presentation] Identification of an HLA-A24 natural antigenic peptide for CTL immunotherapy targeting colon cancer stem cells (2016)
  • Author(s): Miyamoto S, Kanaseki T, Kochin V, Hiratsuka H, Torigoe T
  • Organizer: 第75回 日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（神奈川県・横浜市）
  • Year and Date: 2016-10-06 – 2016-10-08
• [Presentation] HLA-A24リガンド－ム解析による大腸がん幹細胞抗原ペプチド同定とがんワクチン応用 (2016)
  • Author(s): 宮本昇, 金関貴幸, 廣橋良彦, 塚原智英, 佐藤昇志, 鳥越俊彦
  • Organizer: 第44回 日本臨床免疫学会総会
  • Place of Presentation: 京王プラザホテル（東京都・新宿区）
  • Year and Date: 2016-09-08 – 2016-09-10
• [Presentation] Anti-tumor CTL effect targeting the ASB4 gene-derived natural peptide presented by HLA-A24 of human colon cancer stem cells (2016)
  • Author(s): Miyamoto S, Kanaseki T, Takahashi A, Kochin V, Hongo A, Hirohashi Y, Sato N, Torigoe T
  • Organizer: 16th International Congress of Immunology
  • Place of Presentation: メルボルン（オーストラリア）
  • Year and Date: 2016-08-21 – 2016-08-26
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] An HLA-A24 natural antigenic peptide (NAP) for CTL immunotherapy targeting colon cancer stem cells (2016)
  • Author(s): 宮本 昇, 金関貴幸, 高橋あかり, Vitaly Kochin, 本郷 歩, 廣橋良彦, 鳥越俊彦, 佐藤昇志
  • Organizer: 第20回 日本がん免疫学会総会
  • Place of Presentation: 大阪国際交流センター（大阪府・大阪市）
  • Year and Date: 2016-07-27 – 2016-07-29
• [Presentation] 口腔がんにおける新規がん抗原の同定と免疫療法の基礎的研究 (2016)
  • Author(s): 岡本準也, 宮崎晃亘，小林淳一，宮本 昇，荻 和弘，出張裕也，平塚博義
  • Organizer: 第40回 日本頭頸部癌学会
  • Place of Presentation: ソニックシティ（埼玉県・さいたま市）
  • Year and Date: 2016-06-09 – 2016-06-10
• [Presentation] 口腔癌に対するCDDPを用いた放射線併用選択的動注化学療法を施行し５年以上経過した症例の検討 (2016)
  • Author(s): 小林淳一, 宮崎晃亘, 岡本準也, 宮本 昇, 荻 和弘, 出張裕也, 廣川直樹, 染谷正則, 坂田耕一, 平塚博義
  • Organizer: 第40回 日本頭頸部癌学会
  • Place of Presentation: ソニックシティ（埼玉県・さいたま市）
  • Year and Date: 2016-06-09 – 2016-06-10
• [Presentation] ヒトがん幹細胞を標的とするASB4抗原ペプチドを用いたCTL免疫療法 (2016)
  • Author(s): 宮本 昇, 金関貴幸, 高橋あかり, Vitaly Kochin, 本郷 歩, 廣橋良彦, 佐藤昇志, 鳥越俊彦
  • Organizer: 第105回 日本病理学会総会
  • Place of Presentation: 仙台国際センター（宮城県・仙台市）
  • Year and Date: 2016-05-12 – 2016-05-14