2016 Fiscal Year Research-status Report
頭蓋骨縫合部早期癒合症に対する新規microRNA治療開発にむけた基礎的研究
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16K11779
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
小林 起穂 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 助教 (20596233)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 歯科矯正学 / Craniosynostosis / FGFシグナル / miRNA / 先天性疾患 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
アペール症候群（Ap）は、頭蓋縫合早期癒合症（Cs）および中顔面部の劣成長を伴う重篤な不正咬合、四肢の合指症を主徴とする。原因遺伝子として、線維芽細胞増殖因子受容体（FGFR）2における点突然変異が報告されているが、詳細な病態成立機序は不明である。近年、microRNA（miRNA）という新しい遺伝子発現調節機構が骨の発生に重要な役割を果たすことが報告されている。本研究はCs発症に関与するmicroRNAを同定することを目的とした。当分野で飼育するASモデルマウス（Ap-FGFR2 +/S252W）及び同腹コントロールマウス（Ct）（胎生15.5日齢）の頭蓋冠状縫合を摘出し、全RNAを抽出後、DNAアレイ（3D-Gene Mouse Oligo chip 24K、東レ）およびmiRNAアレイ（3D-Gene mouse miRNA Oligo chip、東レ）にて解析を行った。両群間で有意な発現の差が認められたmiRNAは、縫合部における発現量をリアルタイムPCR法（qPCR）にて確認した（各群n=3）。またmiRNAの発現比から変動miRNAを抽出し、データベースTarget Scan Mouseを利用して各種変動miRNAの標的候補遺伝子の検索を行った後、DNAアレイデータと統合解析を行い発現関係が相反する遺伝子候補を抽出した。1265種類のmiRNAについて発現を検索したところ、CtおよびAp-FGFR2 +/S252Wの冠状縫合部において511種類のmiRNA発現が確認された。Ctと比較してAp-FGFR2 +/S252Wでは19種類のmiRNA発現が有意に亢進し、5種類のmiRNA発現が抑制されていた。qPCRによりCtと比較して、Ap-FGFR2 +/S252Wではmmu-miR-182-5p、mmu-miR-205-5p、mmu-miR-206-3pが有為に高発現していた。統合解析の結果これらmiRNAの標的候補としてMast4、Satb2を同定した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
頭蓋縫合におけるmiRNAの役割は全く不明であったが、500種類以上のmiRNAが発生中の頭蓋冠縫合部に発現することが明らかとなり、何らかの制御機能を果たす可能性が示唆された。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後はin vivoにおける当該miRNAおよび標的遺伝子の機能解析を行う予定である。
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| Causes of Carryover |
当該年度内に予定していた動物実験を次年度以降に繰り越ししたため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
実験動物の飼養等に思量する予定である。
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