• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to project page

2017 Fiscal Year Annual Research Report

Analysis of Translesion synthesis (TLS) mechanism by novel assay method

Research Project

Project/Area Number 16K12598
Research InstitutionTokyo Metropolitan University

Principal Investigator

廣田 耕志  首都大学東京, 理工学研究科, 教授 (00342840)

Project Period (FY) 2016-04-01 – 2018-03-31
Keywords損傷乗り越え / 紫外線 / CPD / ポリメラーゼ
Outline of Annual Research Achievements

本研究では、ニワトリDT40細胞を用いて、人工的損傷を導入した合成オリゴDNAを用いて染色体(プラスミドではない)に損傷を入れた後の、複製をモニターし、どのように複製後のプロダクトが変異するのかを調べるためのアッセイ法を作成した。これまでに、DT40での導入に成功しており、H29年度にはヒト細胞においてさらに以下の成果を上げた。
(1)ヒト細胞において様々な損傷乗り越えやその他のポリメラーゼの変異体を作成した。これまでに、点変異体としてPolε(校正エキソヌクレアーゼ活性変異)、Polδ(校正エキソヌクレアーゼ活性変異)の2細胞、遺伝子破壊細胞として、Polι、Polη、Polλ、Polκ、Polβ、PolQ、REV3やこれらの多重欠損などを作成した。(2)主要な損傷乗り越えポリメラーゼのPolι、Polη、Polκ、の各種DNA損傷での役割分担やRev3との関係について解析し、損傷ごとに役割があるものの、ある程度相補性があることを見出した。(3)複製ポリメラーゼδやεの校正エキソヌクレーゼ活性を変異で潰した細胞を作成し、複製ポリメラーゼδの校正エキソヌクレーゼ活性は生存に必須であることや、複製ポリメラーゼεの校正エキソヌクレーゼ活性はチェーンタミネーター活性を有するヌクレオチドアナログやカンプトテシンへの抵抗性に必要であることを見出した。
H30年度には、前年度までに作成した人工損傷導入オリゴを用いた損傷乗り越え研究の結果を論文にまとめるとともに、上記(1)~(3)の分子機構をさらに検討する。

  • Research Products

    (27 results)

All 2018 2017 Other

All Int'l Joint Research (2 results) Journal Article (7 results) (of which Int'l Joint Research: 5 results,  Peer Reviewed: 7 results,  Open Access: 4 results) Presentation (18 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results,  Invited: 3 results)

  • [Int'l Joint Research] IFOM研究所(イタリア)

    • Country Name
      ITALY
    • Counterpart Institution
      IFOM研究所
  • [Int'l Joint Research] ボストン大学/アメリカ国立衛生研究所/スローンケタリング癌研究所(米国)

    • Country Name
      U.S.A.
    • Counterpart Institution
      ボストン大学/アメリカ国立衛生研究所/スローンケタリング癌研究所
  • [Journal Article] Chromatin remodeler ALC1 prevents replication-fork collapse by slowing fork progression.2018

    • Author(s)
      Ooka M, Abe T, Cho K, Koike K, Takeda S, Hirota K.
    • Journal Title

      PLoS One

      Volume: 13(2) Pages: e0192421

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0192421.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] ESCO1/2's roles in chromosome structure and interphase chromatin organization.2017

    • Author(s)
      Kawasumi R, Abe T, Arakawa H, Garre M, Hirota K, Branzei D.
    • Journal Title

      Genes Dev

      Volume: 31(21) Pages: 2136-2150

    • DOI

      10.1101/gad.306084.117.

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] ALC1/CHD1L, a chromatin-remodeling enzyme, is required for efficient base excision repair.2017

    • Author(s)
      Tsuda M, Cho K, Ooka M, Shimizu N, Watanabe R, Yasui A, Nakazawa Y, Ogi T, Harada H, Agama K, Nakamura J, Asada R, Fujiike H, Sakuma T, Yamamoto T, Murai J, Hiraoka M, Koike K, Pommier Y, Takeda S, Hirota K
    • Journal Title

      PLoS One

      Volume: 12(11) Pages: e0188320

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0188320.

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Recruitment and delivery of the fission yeast Rst2 transcription factor via a local genome structure counteracts repression by Tup1-family corepressors.2017

    • Author(s)
      Asada R, Umeda M, Adachi A, Senmatsu S, Abe T, Iwasaki H, Ohta K, Hoffman CS, Hirota K.
    • Journal Title

      Nucleic Acids Res

      Volume: 45(16) Pages: 9361-9371

    • DOI

      10.1093/nar/gkx555.

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Interplay between chromatin modulators and histone acetylation regulates the formation of accessible chromatin in the upstream regulatory region of fission yeast fbp1.2017

    • Author(s)
      Adachi A, Senmatsu S, Asada R, Abe T, Hoffman CS, Ohta K, Hirota K.
    • Journal Title

      Genes Genet Syst

      Volume: Epub ahead of print Pages: -

    • DOI

      10.1266/ggs.17-00018.

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] The dominant role of proofreading exonuclease activity of replicative polymerase ε in cellular tolerance to cytarabine (Ara-C).2017

    • Author(s)
      Tsuda M, Terada K, Ooka M, Kobayashi K, Sasanuma H, Fujisawa R, Tsurimoto T, Yamamoto J, Iwai S, Kadoda K, Akagawa R, Huang SN, Pommier Y, Sale JE, Takeda S, Hirota K.
    • Journal Title

      Oncotarget

      Volume: 8(20) Pages: 33457-33474

    • DOI

      10.18632/oncotarget.16508.

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Human CTF18-RFC clamp-loader complexed with non-synthesising DNA polymerase ε efficiently loads the PCNA sliding clamp.2017

    • Author(s)
      Fujisawa R, Ohashi E, Hirota K, Tsurimoto T.
    • Journal Title

      Nucleic Acids Res.

      Volume: 45(8) Pages: 4550-4563

    • DOI

      10.1093/nar/gkx096.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] 複製フォーク構成因子とヒストンバリアントH2AX、DNA修復因子の遺伝学的関係性の解析2018

    • Author(s)
      阿部拓也、廣田耕志
    • Organizer
      ヒストンバリアント研究会
  • [Presentation] metabolic stress-induced lncRNA(mlonRNA)転写によるクロマチン再編成は、転写と減数分裂期組換えを活性化する2017

    • Author(s)
      千松賢史、廣田耕志
    • Organizer
      染色体ワークショップ
  • [Presentation] DNA トポロジーによるヌクレオソームポジションの規定と転写制御2017

    • Author(s)
      浅田隆大、廣田耕志
    • Organizer
      染色体ワークショップ
  • [Presentation] 局所的ゲノム高次構造を介した転写因子の標的配列結合タイミング制御機構の解析2017

    • Author(s)
      恒川千明、廣田耕志
    • Organizer
      染色体ワークショップ
  • [Presentation] metabolic stress-induced lncRNA(mlonRNA)転写はクロマチン再編成を誘導し、転写と減数分裂期組換えを活性化させる2017

    • Author(s)
      千松賢史、廣田耕志
    • Organizer
      分子生物学会
  • [Presentation] The establishment of highly sensitive and quantitative analysis assay to detect chromosome loss using HSV-TK2017

    • Author(s)
      鈴木雄也、廣田耕志
    • Organizer
      分子生物学会
  • [Presentation] ALC1クロマチンリモデリング因子のゲノム維持における働き2017

    • Author(s)
      廣田耕志
    • Organizer
      分子生物学会
    • Invited
  • [Presentation] オーキシンデグロンシステムを用いたトポイソメラーゼ1の細胞内機能の解析2017

    • Author(s)
      梅村小雪、廣田耕志
    • Organizer
      分子生物学会
  • [Presentation] The regulation of Cohesin in higher eukaryotes2017

    • Author(s)
      阿部拓也、廣田耕志
    • Organizer
      Molecular and Cellular biology meeting in TMU
  • [Presentation] オーキシンデグロンシステムを用いたトポイソメラーゼ1の細胞内機能の解析2017

    • Author(s)
      梅村小雪、廣田耕志
    • Organizer
      バイオコンフェレンス
  • [Presentation] metabolic stress-induced lncRNA(mlonRNA)転写はクロマチン再編成を誘導し、転写と減数分裂期組換えを活性化させる2017

    • Author(s)
      千松賢史、廣田耕志
    • Organizer
      バイオコンフェレンス
  • [Presentation] The establishment of highly sensitive and quantitative analysis assay to detect chromosome loss using HSV-TK2017

    • Author(s)
      鈴木雄也、廣田耕志
    • Organizer
      バイオコンフェレンス
  • [Presentation] 非コードRNAの転写開始によって誘導されるクロマチン再編成の転写や組換えにおける役割2017

    • Author(s)
      廣田耕志
    • Organizer
      遺伝研研究会
    • Invited
  • [Presentation] 局所的ゲノム高次構造を介した転写因子の標的配列結合タイミング制御機構の解析2017

    • Author(s)
      浅田隆大、廣田耕志
    • Organizer
      クロマチン動構造ワークショップ
  • [Presentation] 長鎖 non-coding RNA 転写による クロマチン構造制御メカニズムの解明2017

    • Author(s)
      千松賢史、廣田耕志
    • Organizer
      クロマチン動構造ワークショップ
  • [Presentation] A method to evaluate the frequency of aneuploidy2017

    • Author(s)
      阿部拓也、廣田耕志
    • Organizer
      SMC proteins
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] In vivo evidence for translesion DNA synthesis by replicative DNA polymeraseδ2017

    • Author(s)
      廣田耕志
    • Organizer
      US-JP DNA repair work meeting
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Transcriptional activation via “catch-and-release” translocation of transcription factor Rst2 between activation sites is mediated by local higher-order genome structure2017

    • Author(s)
      浅田隆大、廣田耕志
    • Organizer
      The 9th International Fission Yeast Meeting
    • Int'l Joint Research

URL: 

Published: 2018-12-17   Modified: 2022-06-07  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi