2017 Fiscal Year Annual Research Report
Development of serum-free medium and Its application for basic and clinical research
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16K12897
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| Research Institution | Kagawa University |
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Principal Investigator |
中村 隆範 香川大学, 医学部, 教授 (70183887)
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2016-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 血清 / 無血清 / FBS / 脂肪酸 / 増殖因子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、動物血清に含まれる細胞増殖に関わるタンパク因子群及び脂質・有機酸を、浮遊血球系細胞をモデルに同定・プロファイリングし、100％輸入牛胎児血清（FBS）に頼る、現在の培養法の改善法を図るものである。平成28年度には、FBS中に存在する主要タンパク質であるフェツイン、血清アルブミンなどに結合して各種細胞株の増殖に関わる新たな増殖因子の存在を見出した。本増殖因子は還元アルキル化、95℃の加熱、変性剤である6Mグアニジン塩酸に対して極めて安定であることがわかっていた。平成29年度はこの増殖因子の精製を進めるとともに、引き続き無血清培養系を確立するために、低濃度の血清（FBS: 0.5%-2%)存在下での、インスリン,トランスフェリン,亜セレン酸の混合物を加えることで、血球系細胞の増殖においてFBSを低減できることを確認し、さらに、インスリン,トランスフェリン,亜セレン酸 (ITS)の個々の効果の原因を詳しく検討した。その結果、① Feと結合しているトランスフェリンは血中では30％以下で、飽和度が低いために、低血清下ではFeを結合した飽和トランスフェリンの添加が必要になること。② 必須元素であるセレニウムは血液中ではセレノプロテインとして存在しているが、これも低血清下ではセレノプロテインの濃度低下によってセレニウムの添加が必要になること。③ 培養にはインスリンは比較的高濃度1-10μg/mlの添加が必要である。しかし、血中に存在するインスリン濃度はたかだか数十～数百pg/ml程度なので、血清中のインスリンが増殖因子として機能していることは考え難いことが確認できた。結局、この新規増殖因子は、現在でも最終的な単離にまでは至っていない。しかし、FBSの主要タンパク質であるフェツイン、アルブミンを除去する方法を確立し、29年度にHPLCによる精製に至るまで進展することができた。
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