• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to project page

2016 Fiscal Year Research-status Report

膵臓がん形成における(プロ)レニン受容体 の機能解析

Research Project

Project/Area Number 16K14610
Research InstitutionKagawa University

Principal Investigator

柴山 弓季  香川大学, 医学部, 博士研究員 (90401190)

Project Period (FY) 2016-04-01 – 2018-03-31
Keywords(P)RR / 膵臓がん / ゲノム不安定性 / 発がん
Outline of Annual Research Achievements

本課題は、(プロ)レニン受容体【(P)RR】が膵臓癌形成に関与するかどうかを明らかにすることである。平成28年度は、膵臓がんの起源細胞であるヒト正常膵管上皮細胞を用いて1.(P)RR過剰発現ヒト膵管上皮細胞の樹立 2. (P)RR過剰発現ヒト膵管上皮細胞を用いたヒト全ゲノム解析 3.(P)RR過剰発現ヒト膵管上皮細胞を用いたDNA損傷の有無の検討を実施した。研究実績は以下のとおりである。
1.エピソーマルベクターに(P)RRをコードする遺伝子ATP6ap2のストップコドンを除いたコーディングシーケンス領域のサブクローニングを実施した。さらに、各ドメインの機能解析を実施するため、それぞれ⊿NTF(N-terminal fragment)と⊿CTF (C-terminal fragment)の欠失突然変異体も作製した。ヒト正常膵管上皮細胞にそれぞれのコンストラクトを遺伝子導入し、安定発現細胞株を樹立した。
2.ヒト全ゲノム解析のBcftoolによる変異コール解析により、(P)RR過剰発現細胞で約2倍量の体細胞突然変異(コントロール細胞:124,579; (P)RR過剰発現細胞:239,080;但し、dbSNPに登録されている多型を除いた点突然変異・挿入・欠失。)が同定された。さらに(P)RR過剰発現細胞では膵臓がん患者で体細胞突然変異が普遍的に認められる遺伝子(Nature, 2016)の体細胞突然変異数の増大が確認され、BreakDancerによる解析から転座や逆位といった大規模な染色体再編成が(P)RR過剰発現細胞のゲノム全体で著しく生じていた。
3.(P)RR発現の亢進は、γ-H2AXとp53といったDNA損傷経路の不活性化を認めた。さらにDNA損傷応答を評価するコメットアッセイから(P)RR発現の増大は、DNA修復能力の喪失ををもたらすことが判明した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

膵臓がんの起源細胞であるヒト正常膵管上皮細胞の(P)RR発現の亢進が、γ-H2AXとp53をコンポーネントに持つDNA損傷経路の不活性化および、DNA修復能力の喪失をもたらした。さらに、ヒト全ゲノムレベルの解析において(P)RRが過剰に発現した細胞では、体細胞変異数の増大や大規模な染色体再編成をもたらす事実が判明したことによって、(P)RR発現の亢進は、全染色体レベルでのゲノム不安定性をもたらすことが明らかになった。これらの成果はShibayama et al. Aberration of (pro)renin receptor induces genomic instability in human pancreatic ductal epithelial cells.AACR Annual Meeting 2017で発表する予定である。本課題の主軸となる(P)RR発現の亢進がゲノムの恒常性を破綻させる事実を見出せたことから、現在までの進捗状況を上記のように判断した。

Strategy for Future Research Activity

今後の研究の方向性として、(P)RR過剰発現細胞集団のin vitroおよびin vivoレベルでの表現型の評価に注力する。1.(P)RR過剰発現ヒト膵管上皮細胞における足場非依存性増殖能 2.(P)RRトランスジェニックマウスを用いたがん自然発症の有無 3.(P)RR過剰発現ヒト膵管上皮細胞の免疫不全マウスの腎被膜移植下における腫瘍形成能の評価を実施する。さらに、当初の予定に加えて(P)RR発現の亢進がゲノム不安定性をもたらす分子機構を明らかにする。作製した⊿NTF(N-terminal fragment)と⊿CTF (C-terminal fragment)の欠失突然変異体を用いて,(P)RRのどのドメインがゲノム不安定性に寄与しているかどうか確かめるために、DNA修復能力を評価するコメットアッセイの実施を行うとともに、LC/MS解析のTandem Mass Tag (TMT)を用いて(P)RRと分子間相互作用を持つことが想定されるゲノムの安定性を担う分子の特定を実施する。

  • Research Products

    (7 results)

All 2017 2016

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results,  Acknowledgement Compliant: 1 results) Presentation (6 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results,  Invited: 1 results)

  • [Journal Article] (Pro)renin receptor is crucial for glioma development via the Wnt/β-catenin signaling pathway.2017

    • Author(s)
      Kouchi, M., Shibayama, Y., Ogawa, D., Miyake, K., Nishiyama, A., Tamiya, T.
    • Journal Title

      Journal of Neurosurgery

      Volume: 印刷中 Pages: 1-10

    • DOI

      10.3171/2016.9.JNS16431

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] (プロ)レニン受容体過剰発現で生じるヒト膵管上皮細胞のゲノム不安定性2016

    • Author(s)
      柴山弓季、安田 純、西山 成
    • Organizer
      第39回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2016-11-30 – 2016-12-02
  • [Presentation] 膵臓がんにおける(プロ)レニン受容体とWnt/β-catenin経路を介した腫瘍進展2016

    • Author(s)
      柴山弓季、谷内田真一、西山 成
    • Organizer
      第75回日本癌学会学術総会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2016-10-06 – 2016-10-08
  • [Presentation] Role of (Pro)renin receptor in the activation of Wnt/β-catenin pathway in colon cancer2016

    • Author(s)
      Wang, J., Shibayama,Y., Nakano, D. Hitomi, H. and Nishiyama, A.
    • Organizer
      HYPERTENSION SEOUL. 26th Scientific Meeting of the ISH.
    • Place of Presentation
      Corex, Seoul, Korea
    • Year and Date
      2016-09-24 – 2016-09-29
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 神経膠腫におけるWnt/β-catenin を介した(pro)renin receptorの発現と役割2016

    • Author(s)
      河内雅章、柴山弓季、小川大輔、三宅啓介、西山 成、田宮 隆
    • Organizer
      第17回日本分子脳神経外科学会
    • Place of Presentation
      帝京大学板橋キャンパス
    • Year and Date
      2016-08-26 – 2016-08-27
  • [Presentation] (Pro)renin receptor is pivotal for Wnt/β-catenin-dependent genesis of pancreatic ductal adenocarcinoma2016

    • Author(s)
      Shibayama, Y., Yachida, S., Rahman, A. and Nishiyama, A.
    • Organizer
      第47回日本膵臓学会・第20回国際膵臓学会・第6回アジアオセアニア膵臓学会
    • Place of Presentation
      仙台国際センター
    • Year and Date
      2016-08-04 – 2016-08-07
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] 大腸がんの病態における(プロ)レニン受容体の関与2016

    • Author(s)
      西山 成、柴山弓季、Wang Juan
    • Organizer
      第53回日本臨床分子医学会学術集会
    • Place of Presentation
      東京国際フォーラム
    • Year and Date
      2016-04-15 – 2016-04-16

URL: 

Published: 2018-01-16  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi