2018 Fiscal Year Annual Research Report
Development of efficient production technique for pine wood nematode-resistant seedlings derived from embryogenic cells
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16K14949
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| Research Institution | Forest Research and Management Organization |
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Principal Investigator |
丸山 毅 国立研究開発法人森林研究・整備機構, 森林総合研究所, 主任研究員 等 (20353865)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
細井 佳久 国立研究開発法人森林研究・整備機構, 森林総合研究所, 主任研究員 等 (50353842)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 胚性万能細胞 / マツノザイセンチュウ抵抗性苗 / 不定胚形成 / クロマツ / 体細胞分化 / 外気順化 / マイクロプロパゲーション / プロトプラスト培養 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
今年度は、不定胚由来の再生個体を用いて効率的に順化苗を作出するために植物体の外気順化条件を検討した。ポリエチレングリコールを含んだEM培地で成熟させたクロマツ不定胚を２週間程度脱水処理させた後に発芽用のホルモンフリー1/2EM培地で４～６週間培養した。その後、発芽した不定胚をさらに成長させるため、発芽時と同一組成の培地を含む培養フラスコやプラントボックスに移植し、16～20週間培養を行った。得られた植物体を培地からピンセットを用いて引き抜き、根に付着した寒天を水洗で除去した後に、水で十分に湿らせた鹿沼土又はバーミキュライト培養土を含むプラスティックポットに植付け、透明蓋付きの水切りカゴの中で外気順化を行った。そして、移植後最初の２週間は蓋を閉じたままにし、その後、順化を開始して4週間後に蓋が完全に開くまで徐々に少しずつ開くと、結果的に90％以上のフラスコ苗を順化させることができた。
また、胚性万能細胞のプロトプラスト培養により、効率的な不定胚誘導が可能であるかを検討した。その結果、プロトプラスト単離には、マンニトール、セルラーゼオノズカRSとペクトリアーゼY-23の組合せが有効であることが分かった。プロトプラスト培養については、浸透圧調節材としてマンニトールを用い、植物ホルモンとして2,4-DとBAPの組合せ、培養密度は5×102 ～ 2×103 に調整し、96ウエルプレートで培養することにより、コロニーを形成させることに成功した。得られた不定胚形成細胞を不定胚誘導用培地で培養すると、約6週間後に成熟不定胚を形成させることが確認できた。
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