2016 Fiscal Year Research-status Report
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16K14987
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
北野 健 熊本大学, 大学院先端科学研究部(理), 准教授 (40336219)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉崎 悟朗 東京海洋大学, 学術研究院, 教授 (70281003)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | ゲノム編集 / ノックアウト |
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| Outline of Annual Research Achievements |
メダカにおいて簡易型CRISPR/CASシステムによるF0世代でのノックアウト技術を確立するため、生殖細胞形成に関与するdead end遺伝子に対するガイドRNAとCAS9タンパク質をメダカ胚の1細胞期に顕微注入した。その結果、顕微注入した個体の生殖細胞数を計数したところ、全ての個体で生殖細胞が完全に消失していた。また、顕微注入した個体における遺伝子変異パターンをゲノムPCR及びシークエンス解析したところ、調べた全ての個体で変異が検出された。以上の結果から、本研究条件により、高効率でF0ノックアウトメダカを作製できることが明らかとなった。
次に、養殖魚種におけるこのシステムを確立するため、ニジマスのメラニン合成に関わるslc45a2遺伝子に対するガイドRNAを合成してCAS9タンパク質とともにニジマス胚へと顕微注入したところ、得られた胚で高効率で黒色素の欠損が確認された。これらの個体についてT7ヌクレアーゼを用いて突然変異の有無を解析した結果、体色変異を示したすべての個体で遺伝子配列の欠損、あるいは挿入が確認された。以上のように、合成RNAとCAS9タンパク質を用いたシステムにより、水産有用淡水魚であるニジマスにおいてもF0世代で表現型を得られることが明らかとなった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
実験計画していたモデル魚（メダカ）と養殖魚（ニジマス）において、両方ともに高効率でF0ノックアウト個体を作製できたため、研究は順調に進展していると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は、確立した簡易型CRISPR/CASシステムを、海産魚であるヒラメやサバ科魚類にも応用するための技術開発を進めていく予定である。
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| Causes of Carryover |
予想よりも少ないガイドRNAを合成することで、簡易型CRISPR/CASシステムを確立できたため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
より多くのガイドRNAを合成して、海産魚における簡易型CRISPR/CASシステムを確立する
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