2016 Fiscal Year Research-status Report
エピジェネティクス解析による地方病性牛白血病の若齢発症機構の解明
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16K15044
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| Research Institution | Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine |
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Principal Investigator |
猪熊 壽 帯広畜産大学, 畜産学部, 教授 (70263803)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 地方病性牛白血病 / 牛白血病ウイルス / 若齢発症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
28年度の研究実績は以下のとおり。１）地方病性牛白血病若齢発症牛症例材料の確保：若齢および高齢の地方病性牛白血病発症牛材料の蓄積を図るために、北海道NOSAI及びNOSAI岩手と共同し、牛白血病発症牛の材料採取につとめ、3歳未満の若齢牛5頭及び3歳以上の高齢発症牛31頭の腫瘍化リンパ節・全血等の材料を得た。若齢牛発症牛5頭のうち4頭については、牛白血病ウイルス感染腫瘍細胞のモノクローナルな増殖が確認され、若齢牛が地方病性牛白血病であることが証明された。２）地方病性牛白血病発症牛における牛白血病ウイルス-プロウイルス挿入部位解析：地方病性牛白血病発症機序解明のため、病原ウイルスが宿主遺伝子の特定部位に挿入されたために発症した可能性について解析した。地方病性牛白血病発症牛では牛白血病ウイルス-プロウイルスが単クローン性に挿入されていることを利用し，inverse-PCR産物の遺伝子解析により，宿主ゲノムにおけるプロウイルス挿入部位を特定した。Inverse PCR により地方病性牛白血病発症と判定された3頭の若齢牛材料について、inverse PCR産物の遺伝子解析の結果、牛白血病プロウイルスの組込み部位はそれぞれ11、17、18番目の染色体であることが明らかになったが、遺伝子座の特定には至らなかった。今回の結果から若齢牛EBL発症に牛白血病ウイルス-プロウイルスの組込み部位が関連する可能性は低いと考えられた。地方病性牛白血病の若齢発症機序として、病原ウイルスが特定部位に挿入されることという仮説を排除できた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
28年度は地方病性牛白血病発症牛、とくに36カ月未満の若齢発症牛材料の蓄積を図るために、北海道NOSAI及びNOSAI岩手と共同し、年齢にかかわらず牛白血病発症牛の材料採材につとめ、3歳未満の若齢牛5頭及び3歳以上の高齢発症牛31頭の腫瘍化リンパ節・全血等の材料を得た。また、若齢発症牛5頭のうち4頭については、牛白血病ウイルス感染腫瘍細胞のモノクローナルな増殖、およびB細胞のモノクローナル増殖が確認され、地方病性牛白血病を発症していることが証明された。材料は予想以上に順調に収集されている。ただし、臨床材料対応を優先したために、発がんに関与する遺伝子として、がん抑制（p15, p16, p73），細胞接着（cadherin），DNA修復（MLH1, MGHT），アポトーシス（DAPK）および免疫関連（interleukin, TNFなど）遺伝子解析のためのプライマー設計が実施できなかった。なお、地方病性牛白血病発症牛における牛白血病ウイルス-プロウイルス挿入部位の解析については、Inverse PCR の結果、若齢の地方病性牛白血病発症と判定された3頭のinverse PCR産物の遺伝子解析により、牛白血病プロウイルスの組込み部位がそれぞれ11、17、18番目の染色体であることが明らかになったが、遺伝子座の特定には至らなかった。若齢牛EBL発症に牛白血病ウイルス-プロウイルスの組込み部位が関連する可能性は低いと考えられた。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成29年度以降は以下のように研究を推進する予定である。
１）地方病性牛白血病発症若齢牛症例材料の確保：29年度も引き続き地方病性牛白血病発症若齢牛症例材料を確保するため、NOSAI組織に加えて、北海道内の食肉衛生検査所に研究協力を依頼する。また同時に発症牛の飼育環境・飼養管理状況等疫学情報を収集する。
２）若齢EBL発症牛における発がんに関与する遺伝子の解析：宿主遺伝子として、がん抑制（p15, p16, p73），細胞接着（cadherin），DNA修復（MLH1, MGHT），アポトーシス（DAPK），および免疫関連（interleukin, TNFなど）の各遺伝子に着目し，解析のためのプライマー設計を中心としてPCR系を確立する。また，既に集められた地方病性牛白血病発症牛の材料を用いて対象遺伝子の突然変異の有無を確認する。
３）地方病性牛白血病発症若齢牛症例におけるエピジェネティクス解析：若齢発症牛、高齢発症牛及び健常牛の、まずはがん抑制遺伝子（p15, p16, p73）に着目し、DNA異常メチル化状態の程度を解析する。
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Research Products
(3 results)
