2017 Fiscal Year Annual Research Report
Production of functional RNA from methanol using high transcription potential of methylotrophic yeasts
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16K15089
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
由里本 博也 京都大学, 農学研究科, 准教授 (00283648)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | メタノール酵母 / RNA顆粒 / mRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１. メタノール酵母RNA顆粒の細胞内動態解析
メタノール酵母において、mRNAの貯蔵・分解に関わるRNA顆粒（P-bodyおよびSG）の形成と細胞内動態を解析するため、P-bodyのマーカータンパク質としてEdc3、SGのマーカータンパク質としてPab1およびPbp1を用い、それぞれ蛍光タンパク質との融合タンパク質として発現する株を用い、各種ストレス条件下での各タンパク質の細胞内局在を観察した。その結果、P-bodyは様々なストレス条件下に加え、メタノール培養時にもその形成が認められたのに対し、SGは高温ストレス時にのみその形成が認められた。また高温ストレス時には、ストレス応答性制御因子Hog1がSGに共局在することを明らかにした。
２. メタノール酵母において高度に転写されるmRNAの細胞内動態解析
メタノール培養時に高度に転写されるAOD1遺伝子およびDAS1遺伝子について、転写因子やシグナル伝達因子の遺伝子破壊株では、mRNA量が野生株に比べて顕著に低下したが、P-bodyおよびSGの各構成タンパク質の遺伝子破壊株においては、野生株との明確な違いは認められなかった。AOD1やDAS1のmRNA可視化については、特定のタンパク質によって認識されるmRNA配列を各遺伝子に付加し、その配列を認識するタンパク質を蛍光タンパク質との融合タンパク質として発現するメタノール酵母株を構築することにより、その可視化に成功した。メタノール誘導時やその他の培地への変換時のmRNA動態を解析した。この可視化技術の確立が難航したため、当初計画していた機能性RNA生産条件の検討には至らなかった。
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