• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to project page

2016 Fiscal Year Research-status Report

ES細胞およびマウスにおけるAID技術の確立

Research Project

Project/Area Number 16K15095
Research InstitutionNational Institute of Genetics

Principal Investigator

鐘巻 将人  国立遺伝学研究所, 分子遺伝研究系, 教授 (20444507)

Project Period (FY) 2016-04-01 – 2018-03-31
Keywordsデグロン / ES細胞 / 発現抑制 / オーキシン
Outline of Annual Research Achievements

本研究費受給者は、ヒト培養細胞においてオーキシンデグロン技術を確立した。この方法は、オーキシンの添加により標的とする因子を特異的に、30分程度で分解することを可能とした。本研究の目的はこの技術をマウスES細胞に導入し、さらにはマウス個体への応用を目指すことである。
細胞にこのシステムを導入するためには、OsTIRというユビキチンリガーゼの導入と対象とする因子にデグロンタグを導入する二段階の遺伝学的改変が必要である。H28年度はマウスES細胞のROSA26領域にOsTIR1を導入するためのドナーおよびCRISPRプラスミドを作成した。さらにエディンバラ大学のVoigt Philippと共同でマウスES細胞株E14TF2aに導入し、安定発現株を樹立した。今後は、内在性MCM2をターゲットにデグロンタグの導入を進める。
また、マウスへのオーキシン投与を検討するため、ヌードマウスにすでに作成したHCT116バックグラウンドのオーキシンデグロン株(MCM2株)のゼノグラフト実験を準備開始した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

H28年度は研究論文作成に時間がかかり、実際のタグ導入まで到達できなかった。しかしながら、今後の研究に必要な準備実験はほぼ予定通り遂行することができた。今後は樹立したOsTIR1発現mES細胞を材料に、CRISPRによる実際のタグ導入を行い、当初提案の研究を遂行する。

Strategy for Future Research Activity

提案研究をそのまま遂行できると予想している。まずは樹立したOsTIR1株にタグを導入して、MCM2に対するデグロン株を樹立することを目指したい。さらに同時並行で、マウスへのオーキシン投与実験を行う。マウスに関しては、マウス実験のノウハウを持つ共同研究者と研究を行う。

Causes of Carryover

研究実績の進歩状況で説明した通り、多少当初の計画より研究が遅れているため、実際の使用予算額が多少少なかった。

Expenditure Plan for Carryover Budget

本年度は前年度の遅れを取り戻しつつ、予定通りの研究を行う。

  • Research Products

    (13 results)

All 2017 2016 Other

All Int'l Joint Research (1 results) Journal Article (6 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results,  Peer Reviewed: 6 results,  Open Access: 2 results,  Acknowledgement Compliant: 2 results) Presentation (6 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Invited: 1 results)

  • [Int'l Joint Research] University of Edinburgh(英国)

    • Country Name
      UNITED KINGDOM
    • Counterpart Institution
      University of Edinburgh
  • [Journal Article] Knockout-Rescue Embryonic Stem Cell-Derived Mouse Reveals Circadian-Period Control by Quality and Quantity of CRY12017

    • Author(s)
      Ode KL, Ukai H, Susaki EA, Narumi R, Matsumoto K, Hara J, Koide N, Abe T, Kanemaki MT, Kiyonari H, Ueda HR
    • Journal Title

      Molecular Cell

      Volume: 65 Pages: 176-190

    • DOI

      10.1016/j.molcel.2016.11.022

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Acute Inactivation of the Replicative Helicase in Human Cells Triggers MCM8-9-dependent DNA Synthesis2017

    • Author(s)
      Natsume T, Nishimura K, Minocherhomji S, Bhwmick R, Hickson ID, Kanemaki MT
    • Journal Title

      Genes & Development

      Volume: advanced online Pages: advanced online

    • DOI

      10.1101/gad.297663.117

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Rapid Protein Depletion in Human Cells by Auxin-Inducible Degron Tagging with Short Homology Donors2016

    • Author(s)
      Natsume T, Kiyomitsu T, Saga Y, Kanemaki MT
    • Journal Title

      Cell Reports

      Volume: 15 Pages: 210-218

    • DOI

      10.1016/j.celrep.2016.03.001

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Conditional Budding Yeast Mutants with Temperature-Sensitive and Auxin-Inducible Degrons for Screening of Suppressor Genes2016

    • Author(s)
      Devrekanli A, Kanemaki MT
    • Journal Title

      Methods in Molecular Biology

      Volume: 1369 Pages: 257-278

    • DOI

      10.1007/978-1-4939-3145-3_18

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Chromatin Folding and DNA Replication Inhibition Mediated by a Highly Antitumor-active Tetrazolato-bridged Dinuclear Platinum(II) Complex2016

    • Author(s)
      Imai R, Komeda S, Shimura M, Tamura S, Matsuyama S, Nishimura K, Rogge R, Matsunaga A, Hiratani I, Takata H, Uemura M, Iida Y, Yoshikawa Y, Hansen JC, Yamauchi K, Kanemaki MT, Maeshima K.
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 6 Pages: 24712

    • DOI

      10.1038/srep24712

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Perichromosomal protein Ki67 Supports Mitotic Chromosome Architecture2016

    • Author(s)
      Takagi M, Natsume T, Kanemaki MT, Imamoto N.
    • Journal Title

      Genes to Cells

      Volume: 21 Pages: 1113-1124

    • DOI

      10.1111/gtc.12420

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] オーキシンデグロン法によるヒト細胞内タンパク質の特異的除去と機能解析2017

    • Author(s)
      鐘巻将人
    • Organizer
      日本呼吸器学会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2017-04-22
    • Invited
  • [Presentation] Artificial destruction of active DNA replication forks reveals the HR-dependent fork recovery involving MCM8-92016

    • Author(s)
      鐘巻将人
    • Organizer
      The 10th 3R Symposium
    • Place of Presentation
      松江
    • Year and Date
      2016-11-17
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] MCM8-9は切断誘導DNA複製(BIR)に関与する2016

    • Author(s)
      鐘巻将人
    • Organizer
      第75回日本癌学会学術総会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2016-10-08
  • [Presentation] MCM8-9複合体は切断誘導DNA複製(BIR)に関与する2016

    • Author(s)
      鐘巻将人
    • Organizer
      日本生化学会年会
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      2016-09-26
  • [Presentation] 短鎖ホモロジードナーを利用したオーキシンデグロンタグ付加による迅速なヒト細胞中のタンパク質除去2016

    • Author(s)
      鐘巻将人
    • Organizer
      第一回日本ゲノム編集学会
    • Place of Presentation
      広島
    • Year and Date
      2016-09-07
  • [Presentation] ヒト細胞における染色体機能を理解するためのオーキシンデグロン(AID)法2016

    • Author(s)
      鐘巻将人
    • Organizer
      日本細胞生物学会
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2016-06-15

URL: 

Published: 2018-01-16   Modified: 2022-02-21  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi