2016 Fiscal Year Annual Research Report
Elucidation of the mechanisms of HBV infection using single cell transcriptome analysis
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16K15426
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
本多 政夫 金沢大学, 保健学系, 教授 (00272980)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
橋本 真一 金沢大学, 医薬保健学総合研究科, 特任教授 (00313099)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | ウイルス / 遺伝子 / 感染症 / 発現制御 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
B 型慢性肝炎（CHB）に対する現行の治療のみではウイルスを完全に排除させることはできない。申請者らは独自に開発した包括的１細胞遺伝子発現解析法（特願2014－095011）とB 型肝癌組織から新規樹立したHBV 陽性KM細胞株を用いてHBV 持続感染に必要な宿主遺伝子を同定しHBV 感染症の新たな治療法の確立のための基盤的研究を行うことを目的とした。また、HBV 感染の様々な病態（慢性肝炎・キャリアー・既往感染など）の肝組織を用いて包括的１細胞遺伝子発現解析を行い、これまで不明とされていたHBV 潜伏感染細胞の同定と感染様式の実態を明らかにすることを目的とした。
B 型肝癌組織から申請者らが樹立した新規肝癌細胞KM 細胞を用いて包括的１細胞遺伝子発現解析を実施したところ、3000 個の細胞中1 細胞でHBV のmRNA を発現していた。HBV 陽性細胞で発現上昇する遺伝子を同定しshRNA 発現レンチウイルスによる機能的な遺伝子を絞り込み2 遺伝子を同定した。その2 遺伝子はそれぞれ単独の発現抑制によりcccDNA を抑制し、エンテカビルとの併用で95%以上のcccDNA の抑制を認めた。
NTCP 過剰発現細胞（HepG2-hNTCP-C4）、キメラマウス由来初代肝細胞（PXB）、Crisper/Cas9 ゲノム編集技術を用いて、2 遺伝子をノックアウトした細胞、及びレンチウイルス発現系にて2 遺伝子を過剰発現した細胞を樹立しHBVの複製を評価した。2 遺伝子のノックアウト細胞ではHBV-DNA、cccDNA、pgRNAの低下、過剰発現細胞ではそれらの増加を認めた。2 遺伝子のうち一つ（遺伝子A）はリパーゼに関する遺伝子、もう一つ（遺伝子B）はE3 ubiquitin ligaseに関する遺伝子であった。遺伝子AはHBVのエントリーに関与していると考えられた。一方、遺伝子BはcccDNAの維持に関与していると考えられHBxとの関連が示唆された。CHB肝組織において遺伝子Bは核酸アナログの投与により有意に発現量の低下を認めた。
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[Journal Article] De Novo Emergence of Mesenchymal Stem-Like CD105+ Cancer Cells by Cytotoxic Agents in Human Hepatocellular Carcinoma.2017
Author(s)
Nomura Y, Yamashita T, Oishi N, Nio K, Hayashi T, Yoshida M, Hayashi T, Hashiba T, Asahina Y, Okada H, Sunagozaka H, Takatori H, Honda M, Kaneko S.
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Journal Title
Transl Oncol.
Volume: -
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Branched-chain amino acids prevent hepatic fibrosis and development of hepatocellular carcinoma in a non-alcoholic steatohepatitis mouse model.2017
Author(s)
Takegoshi K, Honda M, Okada H, Takabatake R, Matsuzawa-Nagata N, Campbell JS, Nishikawa M, Shimakami T, Shirasaki T, Sakai Y, Yamashita T, Takamura T, Tanaka T, Kaneko S.
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Journal Title
Oncotarget.
Volume: -
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Deficiency of the hepatokine selenoprotein P increases responsiveness to exercise in mice through upregulation of reactive oxygen species and AMP-activated protein kinase in muscle.2017
Author(s)
Misu H, Takayama H, Saito Y, Mita Y, Kikuchi A, Ishii KA, Chikamoto K, Kanamori T, Tajima N, Lan F, Takeshita Y, Honda M, Tanaka M, Kato S, Matsuyama N, Yoshioka Y, Iwayama K, Tokuyama K, Akazawa N, Maeda S, Takekoshi K, Matsugo S, Noguchi N, Kaneko S, Takamura T.
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Journal Title
Nat Med.
Volume: -
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Jagged1 DNA Copy Number Variation Is Associated with Poor Outcome in Liver Cancer.2016
Author(s)
Kawaguchi K, Honda M, Yamashita T, Okada H, Shirasaki T, Nishikawa M, Nio K, Arai K, Sakai Y, Yamashita T, Mizukoshi E, Kaneko S.
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Journal Title
Am J Pathol.
Volume: 186(8)
Pages: 2055-2067
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Post-progression survival and progression-free survival in patients with advanced hepatocellular carcinoma treated by sorafenib.2016
Author(s)
Terashima T, Yamashita T, Takata N, Nakagawa H, Toyama T, Arai K, Kitamura K, Yamashita T, Sakai Y, Mizukoshi E, Honda M, Kaneko S.
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Journal Title
Hepatol Res.
Volume: 46(7)
Pages: 650-656
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Altered gene expression in T-cell receptor signalling in peripheral blood leucocytes in acute coronary syndrome predicts secondary coronary events.2016
Author(s)
Takashima S, Usui S, Kurokawa K, Kitano T, Kato T, Murai H, Furusho H, Oda H, Maruyama M, Nagata Y, Usuda K, Kubota K, Takeshita Y, Sakai Y, Honda M, Kaneko S, Takamura M.
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Journal Title
Open Heart.
Volume: 3(1)
Pages: e000400
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Hepatitis B Virus (HBV) Core-Related Antigen During Nucleos(t)ide Analog Therapy Is Related to Intra-hepatic HBV Replication and Development of Hepatocellular Carcinoma.2016
Author(s)
Honda M, Shirasaki T, Terashima T, Kawaguchi K, Nakamura M, Oishi N, Wang X, Shimakami T, Okada H, Arai K, Yamashita T, Sakai Y, Yamashita T, Mizukoshi E, Kaneko S.
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Journal Title
J Infect Dis.
Volume: 213(7)
Pages: 1096-1106
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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