2017 Fiscal Year Annual Research Report
Generation of model mice using CRISPR/Cas9
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16K15540
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
新熊 悟 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (00613788)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柳 輝希 北海道大学, 医学研究院, 特任助教 (50755973)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | CRISPR/Cas9 / モザイク病変 / モデルマウス / 遺伝性皮膚疾患 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、モザイク病変を有する遺伝性皮膚疾患モデルマウスを開発することである。表皮水疱症や道化師様魚鱗癬のような重症型遺伝性皮膚疾患モデルマウスの多くは致死性であり、治療研究モデルとして用途が限定される。本研究では、Cas9 nucleaseトランスジェニックマウスに対し、胎生期および新生仔期に経皮的に任意の遺伝子編集を行うことにより、長期生存可能なモザイク状モデルマウスを作製する。本研究の特色は、胎生期および新生仔期に遺伝子編集を行うことにより、blaschko line状やspot状にモザイク病変を有する多彩なモデルマウスを作製できることである。本手法は任意の遺伝子を編集できるため、あらゆる遺伝性皮膚疾患や皮膚癌のモデルマウスの作製に応用可能である。
表皮水疱症、道化師様魚鱗癬、色素性乾皮症モデルマウスを作製するため、Col17a1、Col7a1、Abca12、Xpa遺伝子の遺伝子編集を行うためのアデル随伴ウイルスベクターを作製した。現在、Creリコンビナーゼ依存性Cas9 nuclease-GFPトランスジェニックマウスに対し、アデノ随伴ウイルスベクターを用いて胎生期および新生仔期に経皮的に投与を行っている。また、Creリコンビナーゼおよびguide RNAをともに発現させることが可能なアデノ随伴ウイルスCRISPR/SpCas9システムを用いて wild type マウスの遺伝子編集を行い、モザイク病変を有するモデルマウスを作製している。
さらにCol7a1およびXpa遺伝子に対し遺伝子編集を行ったモザイクマウスに紫外線を照射し、病理組織学的に皮膚がんの発生の有無を確認する。
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