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2016 Fiscal Year Research-status Report

高分子ナノミセルに搭載した転移抑制マイクロRNAを用いた核酸医薬への挑戦

Research Project

Project/Area Number 16K15691
Research InstitutionKagoshima University

Principal Investigator

鑪野 秀一  鹿児島大学, 医歯学域医学系, 助教 (30624655)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 榎田 英樹  鹿児島大学, 医歯学域医学系, 准教授 (80347103)
関 直彦  千葉大学, 大学院医学研究院, 准教授 (50345013) [Withdrawn]
Project Period (FY) 2016-04-01 – 2019-03-31
Keywords腎細胞癌 / 膀胱癌 / microRNA
Outline of Annual Research Achievements

腎癌では「治療抵抗性腎癌マイクロRNA発現プロファイル」に基づき、腎癌組織で発現が抑制されているマイクロRNAについて機能解析を施行した。まずはmicroRNA-210-3pに着目して、ゲノム編集技術であるCRISPR-Cas9を用いたノックアウトを行った。そして、レンチウイルスによりCas9およびguideRNAを発現させるCRISPR / Cas9システムを用いて、腎癌細胞株でmiRNAのノックアウトを行った。guideRNAはWebデザインツールで選択し、また、オフターゲット効果の可能性を最小にするため、いずれのmiRNAに対してもguideRNAは2種類以上作成した。CRISPR / Cas9を導入したいずれの細胞株においても100%に近い発現抑制を得ることができた。microRNA-210-3は腎癌においては正常腎組織と比べて、その発現が上昇していたが、進行癌においては逆にその発現は低下しており、癌抑制的作用を有することが明らかになった。その標的電子の一つとして癌遺伝子的作用を有するTWIST1が挙げられ、カプランマイヤー解析では予後予測因子であることが判明した。
膀胱癌では次世代シークエンサーによるmiRNA発現解析を行い、933個の既知miRNAと17個の新規miRNAの発現を解析し得た。933個の既知miRNAのうち、膀胱癌で有意に発現が低下していた60個のmiRNAの中でリストの上位のものから解析を行ってきた。その結果、microRNA-199 familyの発現高値は膀胱癌患者の予後良好の予測因子であり、インテグリンシグナル伝達を制御して、癌抑制的に働くことが示唆された。このようにマイクロRNAを基点とした膀胱癌の新しい癌シグナル経路が明らかにし、次年度ではin-vivoにおいてナノミセルを用いた癌抑制マイクロRNAのマウス尾静脈投与実験を計画している。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

マイクロRNA発現プロファイルに基づいて実験が進行中であり、結果を論文化できている。

Strategy for Future Research Activity

今後、さらに解析のスピードを速める。腎癌における分子標的薬の著効例や、膀胱癌におけるPD1抗体治療の著効例に対する次世代シーケンサーによる遺伝子・マイクロRNA発現解析も検討している。

  • Research Products

    (2 results)

All 2017

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 1 results,  Acknowledgement Compliant: 2 results)

  • [Journal Article] microRNA-210-3p depletion by CRISPR/Cas9 promoted tumorigenesis through revival of TWIST1 in renal cell carcinoma.2017

    • Author(s)
      Yoshino H, Yonemori M, Miyamoto K, Tatarano S, Kofuji S, Nohata N, Nakagawa M, Enokida H.
    • Journal Title

      Oncotarget.

      Volume: 印刷中 Pages: 印刷中

    • DOI

      10.18632/oncotarget

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Regulation of ITGA3 by the dual-stranded microRNA-199 family as a potential prognostic marker in bladder cancer.2017

    • Author(s)
      Sakaguchi T, Yoshino H, Yonemori M, Miyamoto K, Sugita S, Matsushita R, Itesako T, Tatarano S, Nakagawa M, Enokida H.
    • Journal Title

      British Journal of Cancer.

      Volume: 印刷中 Pages: 印刷中

    • DOI

      10.1038/bjc.2017.43.

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant

URL: 

Published: 2018-01-16  

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