2016 Fiscal Year Research-status Report
新規がん抑制遺伝子の機能不全による卵巣がんの発生機序―治療への応用
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16K15714
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| Research Institution | Miyagi Prefectural Hospital Organization Miyagi Cancer Center |
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Principal Investigator |
山田 秀和 地方独立行政法人宮城県立病院機構宮城県立がんセンター(研究所), がん薬物療法研究部, 特任研究員 (10254012)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
島 礼 地方独立行政法人宮城県立病院機構宮城県立がんセンター(研究所), がん薬物療法研究部, 部長 (10196462)
伊藤 しげみ 地方独立行政法人宮城県立病院機構宮城県立がんセンター(研究所), がん薬物療法研究部, 特任研究員 (80600006)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 婦人科腫瘍学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
BRCA1は、卵巣がんや乳がんに関連するがん抑制遺伝子である。BRCA1は、DNA修復タンパク群を束ねてDNA修復に働く。その機能はリン酸化によって制御されているが、その詳細は明らかではない。申請者らは、独自に、Ppp6c(PP6の触媒サブユニット)がBRCA1に結合すること、さらに脱リン酸活性を持たない変異型Ppp6cはより強く結合することを見いだした。これは、PP6がBRCA1の脱リン酸化を制御し、PP6の異常によりBRCA1は異常過剰リン酸化状態になることを示唆した。そこで、PP6は卵巣がんや乳がんの発生に重要な酵素であるとの仮説を持ち、Prognoscanを調べた。卵巣がん患者コホート研究(オーストラリア、DATASETGSE9891)ではPpp6cの遺伝子発現が低い症例において、生存率が低い(p=0.042)ことが示された。PP6には卵巣がんの発症・悪性化を抑える働きがあることが示唆された。
我々は、PP6の機能不全と腫瘍化の関係を探るため、まず、最も簡便かつ信頼性のある皮膚発がん実験の系を採用している。マウス重層扁平上皮で、変異型KRASとPpp6c欠損を同時に生じさせるという実験を行い、驚くべきしかし予想通りの結果を得た。その結果、我々は、PP6は、RASが異常に活性化した場合、その下流のどこかで抑制的に働き、組織の過形成を抑える役割があるのではないかと考えている。１年目は、実験１により、仮説「PP6が、がん遺伝子による過形成を抑えている機能をもつ」の証明を行っている。また、実験２により、仮説「Ppp6cは卵巣がんの抑制遺伝子としてはたらく」の検証を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
実験１：マウス扁平上皮における、2重変異（Ppp6c欠損とKRAS変異）の導入-- 準備済みのマウスを掛け合わせて、タモキシフェンにより、扁平上皮特異的に、以下の変異を誘導できる3種類のマウスを作製し、発がん実験を行っている。 ①２重変異（変異型KRAS＋Ppp6欠損）マウス：K14-CreTAM; KrasLSL-G12D/＋; Ppp6cflox/flox ② 変異型KRASマウス：K14-CreTAM; KrasLSL-G12D/＋; Ppp6c＋/＋ ③ Ppp6c欠損マウス：K14-CreTAM; Kras＋/＋; Ppp6cflox/flox タモキシフェンの腹腔注射によってKRAS変異または、Ppp6cの欠損を誘導させる。2重変異（Ppp6c欠損＋KRAS変異）導入後の組織を、3週間後まで3日毎に採取し、単独変異（Ppp6c欠損、またはKRAS変異）のそれと比較したところ、2重変異においては、細胞増殖が著しく亢進していることがわかった。
実験２：マウス卵巣における2重変異（Ppp6c欠損とKRAS変異）の導入 -- 卵巣に2重変異（変異型KRASとPpp6c欠損）を導入させるために、Ppp6cflox/flox; KrasLSL-G12D/＋マウスを用いる。また、卵巣に変異型KRASのみを導入するために、KrasLSL-G12D/＋マウスを用いる。それぞれ、開腹手術により卵管漏斗を介して、Ade-CREを感染させることで、卵巣表層上皮細胞に、2重変異（変異型KRASとPpp6c欠損）または変異型KRASを導入させた。
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| Strategy for Future Research Activity |
実験１については、PP6の欠損による腫瘍発生について、免疫組織学的手法を用いて、その詳細を解析する。
実験２：卵巣がん組織について、以下の2点について調べる。①Ppp6c mRNAの発現量（リアルタイムPCR）②Ppp6cタンパクの量（ウエスタンブロット）これら異常の有無と、予後の関連について解析する。治療開発のために以下について検討する。
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| Causes of Carryover |
消耗品費が、想定よりも少なかったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度の消耗品費に上積みし、実験の迅速化を図る。
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[Journal Article] Clinical efficacy of nedaplatin based concurrent chemoradiotherapy for uterine cervical cancer2016
Author(s)
Kagabu M, Shoji T , Murakami K, Omi H, Honda T, Miura F, Yokoyama Y, Tokunaga H,Takano T, Ohta T , Shimizu D & Sato N, Soeda S , Watanabe T, Yamada H, Mizunuma H, Yaegashi N Nagase S,Tase T, Sugiyama T
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Journal Title
a Tohoku Gynecologic Cancer Unit Study. Int J Clin Oncol
Volume: 21（4）
Pages: 735-740
DOI
Peer Reviewed
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